GuruHealthInfo.com

Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.

zdravotnícka legislatíva


UtverzhdenyGlavnym gosudarstvennymsanitarnym vrachomRossiyskoy Federation -Prvá zamestitelemMinistra zdravoohraneniyaRossiyskoy FederatsiiG.G.ONISchENKO9 januára 1998 godaData úvod - 08.06.1998 goda4.2. Metódy kontroly. Biologická Mikrobiologické diagnóza záškrtu FAKTORYLABORATORNAYA INFEKTSIIMETODICHESKIE UKAZANIYAMU 4.2.698-981. Federálne úradníci navrhnuté referencie - laboratoriidiagnostiki záškrtu infektsiiMoskovskogonauchno Výskumný ústav epidemiológie a mikrobiológie im.G.N. Gabrichevskogo (MD Mazurová IK, MD Melnikov k.b.n. Kombarova S., O. Borisova) a DepartamentomGossanepidnadzora ruské ministerstvo zdravotníctva (Žilina NY 0,2). Schválená a nadobudnú účinnosť významnú gosudarstvennymsanitarnym doktora Ruskej federácie, prvý zamestitelemMinistra zdravotníctva Ruskej federácie z 8. apríla 1998 D.3. VvedenyvzamenMetodicheskihukazaniy4.2.589-96"Laboratórna diagnostika nákazy záškrtu".1. Pokyny pre oblasť primeneniyaMetodicheskie koncipovaný tak, aby pomohol spetsialistambakteriologicheskih hygienických laboratórií - epidemiologichoskoysluzhby, zdravotná - ústavnú starostlivosť a výskumným ústavom pre zlepšenie laboratornoydiagnostiki záškrtu infektsii.2. Charakteristika pôvodca záškrt infektsiiVozbuditelem difteriynoyinfektsiiyavlyayutsya toksigennyeCorynebacterium diphtheriae. Netoxigenním Corynebacterium záškrt difteriine príčina infekcie. "etiologické" etihmikroorganizmov význam pri infekčných chorôb (zápal hltana, artritída, endokarditída, atď.), vyžadujú osobitnú dôkaz. Keď vydeleniinetoksigennyh kmene C. diphtheriae z pacientov s podozrením na infekciu nadifteriynuyu by mali venovať pozornosť pravilnostprovedeniya bakteriologické vyšetrenie a vyhodnotenie na základe schopnosti toksigennyhsvoystv.V C.diphtheriae vyrábať ekzotoksinlezhit jav fágov (alebo lysogenního) konverziu. Konversiyanetoksigennyh kmene C. diphtheriae v naoborotvosproizvoditsya toxigénneho a iba v špecifických, experimentálnych podmienok. V tehsluchayah keď počas počiatočnej naočkovaní materiálu izolovaného toxigénneho otbolnyh záškrtu, a na povtornyhobsledovaniyah po liečbe antibiotikami - netoksigennyekorinebakterii záškrtu, možno predpokladať, že pri ispolzovaniiantibiotikov predovšetkým zmizne toxigénne kmene kakbolee citlivé na ich pôsobenie, a netoxigenním shtammyprodolzhayut pridelená. Rovnaká situácia môže byť vytvorený a prisanatsii antibiotiká baktérie nosiče, a zároveň vydelyayuschihtoksigennye netoxigenním Corynebacterium záškrtu. Detekcia Utako médiá v opakovaných prieskumov len netoksigennyhshtammov nemožno vykladať ako strata schopnosti shtammovprodutsirovat ekzotoksin.Taksonomicheski úzke vzhľadom C. diphtheriae sú C.ulceransi C.pseudotuberculosis (C.ovis). Tieto mikroorganizmy - prirodnyepatogeny dobytok a malé dobytok, kone. Otmechenasposobnost týchto druhov baktérií produkujú podobnyydifteriynomu toxín. K dispozícii sú tiež "netoxigenním" kmene. pridelenie Izvestnysluchai "toxický" C.ulcerans v klinickej kartinezabolevaniya podobnej difteriey.Na orofaryngeálne sliznice nosa a normálne chastovstrechaetsyalozhnodifteriynayapalochka Hoffmann (C.pseudodiphtheriticum). Schopnosť izolovať a identifitsirovatdannye baktérie slúžia ako kritérium pri posudzovaní kvality rabotybakteriologov interepidemic period.Vse mikroorganizmov rodu Corynebacterium yavlyayutsyagrampolozhitelnymi tyčinky, ktoré netvoria spóry obladayuschimirazlichnoy stupeň polymorfizmu. Väčšina druhov rastie lepšie vaerobnyh usloviyah.Obychno kolónie mikroorganizmov rodu Corynebacterium naplotnyh živného média (napríklad na krvnom agare) imeyutserovato - biele alebo žltkasté, nepriehľadný ilipoluprozrachnye, guľatý tvar, priemer 1 - 3 mm. Najčastejšie onibyvayut mäkká konzistencia maslový, hoci niektoré druhy rodakorinebakteriimogutobrazovyvat hrubý R-kolonii.Predstaviteli tohto druhu nemajú vysokú fermentativnoyaktivnostyu. C.diphtheriae rastú 37sh ° C, odolná voči nizkoytemperature citlivé na vysokej. Všetky dezinfekčné veschestvav bežné koncentrácie (3-5%) korinebakteriidifterii zničil počas 20 - 30 minút. Toxický C.diphtheriae boleechuvstvitelny voči antibiotikám ako netoxigenním. Vozmozhnopoyavlenie antibiotikám rezistentné kmene. Široko opredelyatchuvstvitelnostkantibiotikam izoláty otbakterionositeley by nemala byť vzhľadom k vzorke nesúlad rezultatovlaboratornoy proti pôsobeniu antibiotík na telo vozbuditelyadifterii cheloveka.Dlya C.diphtheriae vyznačujúci významný polymorfizmus -raznoobrazie veľkosť a tvar buniek. Bunky majú tvar kluby, rakety atď ruje bunka sprostredkovanie pripomína rimskietsifry X, V. Keď farba je často nájdený vyrazhennayavnutrikletochnaya prúžkovanie, vzhľadom k prítomnosti zerenvolyutina. Popísaný afinita volutin k metylénovej modro a tieto priobrabotke farbivá granule alebo pásy (zhluky granúl) škvrna modrej farby, a v niektorých protoplazmy sluchayahmozhet získanie rozovyyottenok.Ispolzovanievbakteriologicheskoy okraskipoGramuyavlyaetsyanetselesoobraznym praxi, alebo dokonca poskolkukletkiC.diphtheriaelegkoobestsvechivayutsya spirtomimogutvyglyadetvmazkegramvariabelnymi gramotritsatelnymi.Dlya C.ulcerans a C .pseudodiphtheriticum sklonnostk vyznačujúci sa paralelného usporiadania buniek. 24-48 h kultúry etihvidov sú často vajcovitého tvaru kletok.Po nevytvárajú kolónie a niektoré biochemické svoystvamC.diphtheriae rozdelených do kultúrno - biohimicheskievarianty - gravis, mitis, intermedius.Cherez 48 - 72 hodín po varianty rastového mitis tvorí typ koloniiS - hladký, s priemerom 1 - 2 mm-variant SR-gravisobychno konvexné kolónií so zdvihnutým o priemere 2 - 3 mm kolónií vyhotovenie intermedius - s-type, malé, ploché, hladké, zrovnané priemer hrán, 5-1milimetr. Nasledujúci text opisuje iba dvakulturalno - biochemické prevedenie - gravis a mitis, tak kakbiovar intermedius vzácne a biochemické svoystvamne líši od biovary mitis.Na krvi telluritovyh médiá po 48 hodinách rastu koloniiC.diphtheriae prevedenie gravis, rovnako ako kolónie C.ulcerans, čierna, matný majú radiálne ryhovanie. KoloniiC.pseudodiphtheriticum majú charakteristický svetlo obodok.V bakteriologicheskoypraktikeopiratsyatolko namorfologicheskie vlastnosti kolónie alebo mikrobiálnych buniek priidentifikatsii C.diphtheriae, nie je možné. Opisanysluchai bakteriologické hypo- a hyperdiagnostics (55% a 14,5%, v uvedenom poradí), keď sú použité uchettolkomorfologicheskih znamenia. Pri identifikácii C.diphtheriaeneobhodimo použití testovací komplex predovšetkým patogenity (toxigénnosť) hlavné priznakavozbuditelya difterii.Opredelenie toxigénnymi vlastnosťami vykonáva bacteriologists prvý deň rastových podozrivých kolónií na platniach pervichnogoposeva materiálu. Aby sa zabránilo chybám v koryneformní baktériu stanovenia toksigennyhsvoystv, je nutné študovať tento údaj umaksimalnogo počtu kolónií z dosiek primárnych poseva.Pri techník zhody opísaných nižšie môžu byť študované toksigennostbolee ako 20 podozrivých kolónií z jednej analýze. Nelzyaizuchat materiál na množné raste podozrivú koloniytolko jeden - dva blyashkah.Fermentativnaya aktivity mikroorganizmov študovaného putemopredeleniya tsistinazy enzým ureáza, schopnosť štiepiť dokisloty glukózu, sacharózu, škrob. V zriedkavých prípadoch, kogdaneobhodimo identifikovať C.ulcerans, pridá navosstanovlenie dusičnanov testovacie nitrity.Uchityvaya, že keď difteriynoyinfektsii identifikácia patogén prednej prvok je stanovenie prítomnosti toxínu otsenkidrugihsvoystvimeet pomocné znachenie.Ispolzovanie "dlho" sacharid je počet redundantných priidentifikatsiya C.diphtheriae.Prakticheskimbakteriologam zaoberá laboratórnej diagnostiky záškrtu, nie trebuetsyaprovodit identifikáciu na druhy iných mikroorganizmov rodaCorynebacterium. V rovnakej dobe, v laboratóriu, kde spôsobil provoditsyadiagnostika choroby "nedifteriynymi"Corynebacterium, nedostatočné využitie aj "dlho"sacharidov riadok. Pre presné identifikačné údaje mikroorganizmovneobhodimo použiť chemotaxonomic výskumné metódy, ako je napríklad detekcia prítomnosti mykolových kyselín, bunkovej steny baktérií a niektoré vsostave drugie.Takim spôsob mikroorganizmus je vybraný vozbuditelemdifterii ak má toxigénnymi vlastnosťami opredelennymspektrom enzymatickú aktivitu (štiepenie glukózy, škrobu, neprítomnosť sacharózy rozkladu enzýmu tsistinazy prítomnosť, neprítomnosť fermentaureazy) a charakteristické morfologické -kult uralnymi príznaky (tvorba kolónií na čierne alebo serogotsveta krovyano - telluritovyh prostredie na mieru, prineobhodimosti, bunková morfológia - polymorfné netvorí sporpalochki) .3. IssledovanieBakteriologicheskoe bakteriologické štúdie boli vykonané na laboratornoydiagnostiki záškrtu infekciu, identifikovať zdroje infekcie pre prevalencie toxigenic inablyudeniya korinebakteriidifterii.VZYaTIE a dodacie MATERIALA1. Úspech bakteriologického vyšetrenia v znachitelnoystepeni závisí na včasné a presné zachytenie materiala.2. Užívanie materiálu so špeciálne obuchennyemeditsinskie zdravotníkov - starostlivosť uchrezhdeniy.3. V štúdii na preskúmanie hltana a záškrtu nos.Pri záškrtu vzácne lokalizácií (oko, ucho, rany, kožu, vagína) vedľa lézie by mal tiež brať materiál z smindalin nosa.4. Ak vezmeme materiál, sa vykonáva za použitia sterilných tampónov vatnyhsuhih. Pre ich prípravu cez drevenú ilimetallicheskie (z nerezovej ocele) tyče, jedna z kontsovkotoryh tesne navinutý vrstvu vaty (primerno120 mg vatový tampón). Tampóny by mala byť vo forme "kvapky"a nie"vreteno", Tampóny sú namontované v skúmavke s korkom alebo vatnymiprobkami tak, aby koniec tampónu nedotýkal dna a stenokprobirki. Sterilizácia tampóny v teplovzdušnej rúre pri temperature140sh C počas jednej hodiny, alebo v autokláve pri 0,5 atm. 30 min.5. Materiál z orofaryngu a nosových výterov prijímanie jednotlivých prázdny žalúdok, alebo nie skôr ako dve hodiny po jedle, kedy horoshemosveschenii, špachtľou, bez dotyku tampón jazykovej ivnutrennih povrchy tváre a zubov. Jeden tampón sobirayutmaterial s léziami orofaryngu - mandlí a prineobhodimosti - s oblúkmi mäkkého podnebia, maternice alebo hltana zadneystenki. V prítomnosti plaku, materiál by mal byť prijaté sgranitsy choré aj zdravé tkanivá, ľahko tlačí na nihtamponom. Pre odber materiálu z nosa pomocou iného tampónu, ktorý je zavedený ako prvý v jednom a potom v druhej nosovej dierky, nekasayas snaruzhi.6 nozdry. Keď laryngoskopie materiál (sliz film) sobirayutneposredstvenno hrtanu. Materiál s lézií kozhisleduet zbierať suchý tampón po odstránení chrást alebo strupa.7. Tampóny majú bytdostavleny v laboratoriyunepozdnee 3 hodiny po užití materiálu. Keď provedeniiobsledovaniya kontingenty v odľahlých oblastiach bakteriologicheskihlaboratory, odporúča sa rastlinný materiál na pohár spitatelnoy prostredia alebo použite transportné sredu.8. V prípade, kedy je dopravný prostriedok materiálu sobirayutsuhim tampónom namočeným v skúmavke so životným prostredím, a zabezpečí, že zástrčka nie je vlhký tampón. Všimnite si, že primenenietransportnoy prostredie rozširuje vydaním finálnej otvetana jeden sutki.9. Pohár (alebo skúmavka s transportným médiu) s posevomissleduemogo materiálu môže byť umiestnená pre odchov vtermostat pri 37sh C počas 15 - 18 hodín, po ktorej dodávajú vlaboratoriyu.10. Počas prepravy na dlhé vzdialenosti, ako tampóny mozhnoispolzovat vopred namočených rastvoromglitserina. Tampón impregnovaný 5 percent roztokom glycerín vdistillirovannoy vôd vypúšťaných na stene nádoby s roztokom, zlepšiť in vitro, rovnako ako suchý tampón a autoklavované pri0,5 atm. 30 Min.11. Studený skúšobný materiál sezóna je dodávaný vo vreciach vbaklaboratoriyu - termosky, aby sa zabránilo jeho zamerzaniya.12. Vsluchaeneobhodimosti Corynebacterium záškrtu v postmortalnyhissledovany materiáli tselesoobraznobrat s mandlí, hrtanu, a nosnej dutiny, ako vo vnutrennihorganah redko.13 patogénu detekovaná. Každá rúra sa testovanej látky (hltanu, nosa ilidrugaya lokalizácia) je pripojený na číslo. Počet pripojené rúrky spiskeukazyvaetsya, priezvisko, krstné meno (alebo jeho iniciály), vek, názov inštitúcie, vedenie materiál alebo domáce adresobsleduemogo, Účelom tohto prieskumu (s diagnostickým ukazaniemdiagnoza Na základe epidemiologických údajov, preventívna starostlivosť), ku dňu berie materiala.HOD výskumu. PRVÁ DENPosev materiala.Material pre vyšetrovanie orofaryngálny, nazálne alebo drugihporazhennyh sedadlá oddelene vrúbľovať na povrchu hustá živných médií izrekomenduemyh, naleje do šálok Petri.Posev z jednej plochy na výrobu jednej šálky pomocou prietom polovica povrchu semien strednej izrotoglotki materiálu, a druhý - pre materiál plodín z nosa. Keď posevemateriala z kože alebo okolia pridať ďalšiu šálku. Neprípustné materiál plodín od niekoľkých jedincov na chashku.Pri očkovacej materiál sa vtiera do média, zo všetkých strán tampón nauchastke plochu 2 x 1 štvorcový. cm - tvorba, ako "detské ihrisko"Je to nutné. Potom to isté tampón zaočkované ostavshuyusyapoverhnost 1/2 šálky. Výsev vyrábať časté neperekryvayuschimisyashtrihami bez vybratia tampónu z povrchu živného média a nemennú polohu tampónu. Táto metóda umožňuje zaseyatves očkovacej materiál sa tampónu na získanie izolovaných kolónií (chistuyukulturu) pre ďalšiu identifikáciu siatie priamo na chashkepervichnogo že skracuje testu odnisutki. Inokulované dosky alebo trubice obsahujúce transportné médium pomeschayutv termostat na 37sh C. Sejacie transportného média na výrobu dedenie deň hustá médium tampón ostenki lisované rúrky alebo slučky, pričom materiál z osadka.Posev by mali byť vykonávané na miskách s médiom, teplote alebo zahriate prikomnatnoy v inkubátore (15 - 20 minút) .VTOROY day1. Kolónie pestované na dosky 24 prostredníctvom prehliadania chasaposle očkovacieho materiálu (v prípade, že materiál nanesené na druhom polovinednya je sledovanie sa vykonáva v presne 24 hodín, tj. Aj druhá polovica dňa), a to buď vizuálne alebo pomocou stereoskopického mikroskopabinokulyarnogo (MBS) .2. Šálky s kolónií, ako je záškrt, ktoré bolo prijaté dlyadalneyshey identifikovať kultúru vo všetkých testoch. Mikroskopiipreparatov - tampóny "podozrivý" Kolónie môžu byť nevodivé. "podozrivý" kolónie krovyano - telluritovyhsredah po 24 hodinách rastu svetla - šedá, konvexné, bolo zrovnané okraje, do 48 hodín - šedá s kovovým odtieňom, srovnymiili mierne zubaté hrany, drobenie priprikosnovenii slučka alebo mäkkú konzistenciu. z "pochybný"kolónie sa pripraví prípravky - mazki.Kletki Corynebacterium záškrtu z kultúry pestovanej na sredahs inhibítory rastu (telluričitanu draselného, ​​hinozol) môže bytukorocheny, zahustený, ale ich vlastné umiestnenie a polimorfizmsohranyayutsya. Vyhodnotenie morfologických zvláštnosťou nie je pozvolyaetustanovit druhov mikroorganizmov, ale daetvozmozhnost mal vziať do rodu korinebakteriy.Esli mikroskopia výstava coli charakteristické rodakorinebaktery, tieto kolónie sú vybrané pre dalneysheyidentifikatsii vo všetkých testoch. V prípade ostatných formmikroorganizmov (koky, kvasinky, spor tyče), tieto kolónie dalneysheeizuchenie prekraschaetsya.3. V prípade rastu "podozrivý" Podobné kolónie okamžite pristúpiť k štúdiu ich vlastností toxigénnymi štúdie svoystv.Toksigennye nie menej ako 2 izolirovannyhkolony výsevom jednu polovicu každého z kolónií na strednej dlyaopredeleniya toxigénnosť a nepálené slučkou, - na Pisa médiá a druhú polovicu kolónií - do skúmavky s skosený syvorotochnymagarom pre zachovanie a akumuláciu kultúry. Keď nevozmozhnostisnyat 1/2 kolónie pre siatie na toxigénnosť a na strednej materiálu Pizuispolzuetsya kolonii- celý plodín na agarisklyuchaetsya skosenou a ďalej z kultivačných trubíc používaných sproboy Pisa. Vzhľadom k tomu, že po 24 hodinách rastu veľkosti kolónií a materiálu imeyutnebolshie môžu 1/2 alebo 1 kolónie bytnedostatochno pre akumuláciu proti záškrtu toxínu vo vzorke natoksigennost, a že v materiáli mogutnahoditsya súčasne toxický a netoxigenním raznovidnostikorinebaktery záškrt, je nevyhnutné skúmať toksigennyesvoystva od je to možné, pri maximálnom počte kolónií (viac ako 20), miešanie na 5 - 7, podobne ako jeden blyashku.4 kolónií. Ak to nie je možné, aby vzorka nastavenie toksigennostklassicheskim metódy (pozri. S. 3) v dôsledku nedostatočnej velichinykolony, ich štúdia, miešanie rovnakého typu kolónie neskolkihblyashkah. Nehorí cez slučku, naočkované v stredu Pisa. Šálky spervichnym siatie skúšobný materiál bol znovu umiestnený vtermostat dobu 24 hodín a znovu prechádzanie (o tretisutki) .5. Ak iba jedna kolónie rastie, môže byť zasiate nasredu pre určenie toxigénnosť a bez vypaľovanie slučky na stolbiksredy Pisa určiť tsistinazy. Identifikatsiimozhno pre ďalšie použitie kultivačné skúmavky so vzorkou alebo s Pisa blyashkicherez 48 hodinách rastu, alebo 24 hodinách rastu pri vlastností vyyavlennyhtoksigennyh kultury.6. Za účelom vydania predbežného odozvu na rastové sluchaemnozhestvennogo podozrivých kolónií môže proizvestiposev niekoľko kolónií do tekutého média dlyapostanovki Phragmites, Sachsa doplniť ďalšiu vzorku (3 -5 podobné kolónie udržať po 30 min inkubácie.) A vzorka Pisa (5 - 6 Podobné kolónie , čo predstavuje až 3 hodinách inkubácie). Priharakternoy pre Corynebacterium záškrtu v MBS morfológia kolónií, morfológia buniek podľa mikroskopia, Sachsa negatívna vzorka je vzorka pozitívne výsledky Pisa, Phragmites môže vydatpredvaritelny odpoveď na detekciu kultúry podozrivé nakorinebakterii záškrtu po 48 hodinách (na tretí deň) s očkovacím momentapervichnogo skúmané materiala.TRETY day1. Po 24 hodinách, keď sa určitý liniypretsipitatsii na médiu pre stanovenie toxigénnosť, polozhitelnoyprobe na tsistinazu, študovali kultúry identifikované kakkorinebaktery toxigénnymi difterický a výstup dokumentirovannyyotvet.Pri neprítomnosť špecifických zrazeninovú čiar na strednej dlyaopredeleniya toxigénnosť, doštičky boli inkubované po dobu ďalších 24 chasa.2. Kultúra pestované na agare alebo v sére sproby Pisa (po vyhodnotení jej čistoty) sa očkujú v médiu dlyaopredeleniya biochemickej prevedenia (sacharóza, glukóza, škrob) ifermenta ureáza (hydrolýzy močoviny) 0,3. Dosky s primárnym očkovanie issleduemogomaterialaprosmatrivayut vizuálne alebo re-MBS 36 -48 hodinách inkubácie v inkubátore. V prítomnosti "podozrivý"Kolónie študovať ich toxigénnymi vlastnosti tsistinaznuyu aktivitu ivydelyayut čistej kultúry na agarovom skoshennyysyvorotochny (cm. Druhý deň štúdie, s. 3) .Ak žiadne kolónie podozrivých korinebakteriidifterii, konečnú odpoveď, ktorá Corynebacterium difteriine vyyavleny.Pri žiadny rast na agarovom počiatočné naočkovaní cherez48 hodín inkubácie, v niektorých prípadoch vyžaduje opakované užívanie iissledovanie materiálu. Úplná neprítomnosť rastu často vsegosvidetelstvuetonarusheniipravilbakteriologicheskogoobsledovaniya (prevzatia, sadby a kultivirovaniyaissleduemogo) .CHETVERTY deň (alebo piateho) 1. Keď sa špecifickú precipitačnú línia dlyaopredeleniya toxigénnosť prostredie (24 hodín inkubácie, vzorky natoksigennost 48 rast primárneho očkovania hodina), čím sa získa polozhitelnoyprobe tsistinazu dokumentované odpoveď vydeleniitoksigennyh difterii.2 Corynebaktérií. Kultúra pestované na agare alebo séra sproby Pisa, po stanovení jej čistoty, sa inokuluje na médiu dlyaizucheniya biochemických vlastností (Hiss médiu s sacharóza, glukóza, škrob, vzorka Sachsa s močovinou alebo pôda) .3. Opäť (po 48 hodinách), do úvahy výsledky vzorke natoksigennost predstavuje počas 2. deň štúdie. Odnovremennoproizvodyat sacharolytické na udržanie vlastností a Ureáza vprobah stanovená na 3 dni issledovaniya.Pri absencii špecifických zrazeninovú čiar 48 vzorky chasovposle zastávky až toxigénnosť ale polozhitelnyhrezultatah vzoriek pre tsistinazu, glukózy, ureázy negatívne rezultatahprob a sacharóza, kultúry identifikovaných kakkorinebakterii záškrt netoxigenním, označujúce biohimicheskogovarianta.Pri izoláciu toxigénneho Corynebacterium difteriidopolnitelno dať odpoveď o biochemické zaiste tvah (ili96 72 hodín po počiatočnom vysiatí materiálu) .BAKTERIOLOGICHESKOE ZAKLYUCHENIE1. Prítomnosť špecifických zrazeninovú čiar s opredeleniitoksigennyhsvoystv, pozitívnym testom na tsistinazu, negatívnym testu na Ureáza, kultúra ibiohimicheskie charakteristických vlastností (sacharóza, glukóza, škrob), pozvolyayutzaklyuchit, ktorá sa vzťahuje k izolovaným kultúr korinebakteriydifterii myseľ toxický, biochemické alebo mitis.2 prevedení gravis. Neprítomnosť špecifických zrazeninovú čiar s opredeleniitoksigennyhsvoystv, pozitívnym testom na tsistinazu, negatívnym testu na Ureáza, kultúra ibiohimichekie charakteristické vlastnosti možno usudzovať, že izolované kulturaotnositsya k druhu Corynebacterium záškrtu, netoxigenním, biochemické alebo mitis.3 prevedení gravis. V prítomnosti zrazeninovú čiar zhodné ovládanie spetsificheskimliniyam kmeňa Corynebacterium záškrtu, polozhitelnyhprob ureázy tsistinazu, glukóza a škrob fermentácie, neprítomnosť sacharózy fermentácia vnitrity žiadna redukcia dusičnanov, kultúra patria k koryneformní ultserans nevadí tvorby toxínov variant.Pri žiadny zrazeninovú čiar pri určovaní toksigennyhsvoystv a ste všetky ostatné funkcie charakteristické dlyakorinebaktery ultserans, netoxigenním možnosť ibakteriologichesky odpovede sa považuje za negatívny ym.4. Ak zvolíte Corynebacterium Gofmanailidrugihdifteroidov, bakteriologická reakcie otritsatelnym.5 veriť. V niektorých prípadoch, keď diagnostické vyšetrenia a poepidpokazaniyam predbežná odpoveď môže byť poskytnutá. Etotrebuet nastavenie ďalších vzoriek, prítomnosť kachestvennyhpitatelnyh prostredie, skúšobné - systémy pre výrobu a Phragmites spetsialnoobuchennogo zamestnancov. Predbežná reakcia môže byť vydaný viacnásobné rast podobný prinalichii "podozrivý" koloniyna Počiatočné naplnenie misky po 24 hodinách inkubácie (pozri. vtoroyden štúdie, č. 6), .Predvaritelny odpoveď sa môže meniť po okonchaniyabakteriologicheskogo issledovaniya.6. Kmene Corynebacterium záškrtu atipichnymimorfologicheskimi, biochemické, vlastnosti toxigénne Corynebacterium ishtammy ultserans by mala byť určená federalnuyureferens - laboratórium pre diagnostiku infekcie záškrtu priMoskovskom Výskumného ústavu epidemiológie a mikrobiológie im.G.N. Gabrichevskogo pre ďalšie štúdium (125212 Ul Admirál Makarov, 10). Schéma bakteriologických štúdie1 denPosev issleduemogomateriala na selektivnuyudifferentsialno - diagnostického alebo, ak je to nutné, vtransportnuyu médiá. Inkubácie v inkubátore pri 37sh C.2 deň (24 hodín) 1. Štúdia kolónie, pokiaľ je to možné - na postanovkaproby toxigénnosť, tsistinazu a siatie kultúre skoshennyysyvorotochny agar.2. Pri použití transportné médium, musí byť proizvestiperesev na selektívne diferenciálu - diagnostické sredu.3. Pri viacerých rast, ak je to nutné, mozhnoprovesti štúdie pre vydanie predbežného odpoveď -Ďalšie ochutnať Pisa, Sachsa a plodín "podozrivý" koloniyv kvapalné médium pre detekciu toxínu záškrtu vRNGA.3 deň (48 hodín) 1. Ziskovosť analýza vzoriek pre toxigénnosť a tsistinazu nastaviť na druhý deň štúdie. Ak nalichiyaspetsificheskih zrážkových liniek a pozitívna vzorka Pizuvydayutdokumentirovannyyotvet pridelenie toksigennyhkorinebaktery difterii.2. Výsev čistú kultúru vybraný druhý denissledovaniya, Hiss v médiu pre štúdium biochemické vlastnosti (sacharóza, glukóza, škrob, močovina) 3. Prehodnotenie (48 hodín), primárny posevavizualno šálky alebo pomocou MBS. Staging testami toxigénnosť, tsistinazu a skríning kolónií na Serum agar.4 skosené. V prípade dopravného prostredí, predmetu issledovaniyasm. počnúc n. 1 druhý deň a potom na skheme.5. Vydachabakteriologicheskogootvetaobotsutstviikorinebaktery difterii.6. Pri nastavení RNGA pre detekciu toxínu záškrtu prinalichii pozitívny výsledok tejto reakcie a detekcia uissleduemoy kultúra tsistinazy enzýmu neprítomnosti fermentaureazy môže dať predbežný odozvu na pridelenie vozbuditelyadifterii.4 deň (72 hodín) 1. Účtovanie kultúry toxigénnymi vlastnosti vybraných denissledovaniya 3 (po 48 hodinách rastu primárneho siatie), a reakcia pridelenie vydachadokumentirovannogo toxický korinebakteriydifterii. Siatie kultúr vybrané pre stanovenie biohimicheskihsvoystv (sacharóza, glukóza, škrob, močovina) .2. Účtovné kultúra biochemické vlastnosti (toxický ilinetoksigennoy) pridelené v druhom dni štúdie (cherez24 hodine inkubácie Počiatočné naplnenie) .Vydacha bakteriologické reakcie pridelenie netoksigennyhkorinebaktery záškrtu označujúci idopolnitelnogo Rejdová čap biochemickú reakciu biochemických vlastností záškrtu toksigennyhkorinebaktery pridelených ranee.5 deň (96 hodín) vydávanie pridelenie bakteriologické odpovede (48 chasovinkubatsii počiatočné naplnenie) alebo toxický netoksigennyhkorinebaktery záškrtu y Azan biochemické varianta.4. Metódy identifikácie patogénnych difteriynoyinfektsiiOPREDELENIE toxický KORINEBAKTERIYDIFTERII vlastnosti pomocou zrážacie reakcie v metóde na stanovenie toxigénnosť korinebakteriydifterii (Elek test) gélu na báze leží čítač proces immunodiffuziitoksina a Antitoxická protilátok v hustom živnom médiu. Namiesto toho, aby optimálne kvantitatívne korelácia medzi toxínu produkovaného Corynebacterium a antitoxínu nafiltrovalnuyu kriedový papier je ich interakcie s obrazovaniempretsipitata ako biele čiary alebo "fúzy".Toksigennost Corynebacterium záškrt stanovené, zvyčajne v čistej kultúre (alebo kultúry jednotlivých kolónií s skoshennogoagara, alebo vzorka Pisa). Zmesné kolónie alebo kultúry zagryaznennyepostoronneymikrofloroy môžu byť tiež testované natoksigennost. Vzhľadom k tomu, v tomto prípade, sa gél sa vyzráža vagarovom skúseností by mala byť opakovaná s vyhradenými chistymikulturami.Dlya výrobného vzoriek pre toxigénnosť musí mať: sterilné Petriho misky s plochým dnom, živnom prostredí - agarMartena alebo suchým médiom komerčné živnom normalnuyusyvorotku dobytka krvi, sterilné izfiltrovalnoy papierové prúžky s rozmermi 1,5 cm x 8 cm, ochischennyyfermentolizom špecifické sorpčná a protijed záškrtu (vdalneyshem uvedeného antitoxínu) protivodifteriynuyuantitoksichesk th konského séra, terapeutické (v dalneyshemimenuetsya antitoxický sérum), alebo hotový papier diskis antitoxín sa na ne vzťahujú, a - kontrolnyytoksigenny Corynebacterium záškrtu kmeň 24 až 48 hodina rosta.Prigotovlenie šálky pre nastavenie probyna toksigennostPitatelny agar na určenie toxigénnosť tselesoobraznorazlivat trubíc 10 ml (množstvo potrebné dlyaprigotovleniya jedna šálka). Pri veľké množstvo práce pitatelnyyagar rozdelí do liekoviek v 70 - 80 ml (7 - 8 vzorka šálky natoksigennost). Živný agar by rasplavlivat tolko1 viac rôznych topenia zhoršuje vlastnosti média. Pitatelnyyagar rasplavlivayut vo vodnom kúpeli pri 90SH C, okamžite odstránený izbani, ochladí sa na 50sh C a pridá sa 20% sérum krupnogorogatogo dobytok. Tak, sa pridá do 10 ml živného agaru 2 mlsyvorotki dobytok, mieša sa a vleje sa za sterilných podmienok do sterilnej Petriho misky, na dne raspredelyayutsosedu pozor otáčania chashki.V stredu misky na povrch tuhnúcim agar obozhzhennympintsetom umiestni prúžok filtračného papiera (propitannuyuantitoksinom alebo Antitoxická sérum) .Chashku suší v sušiarni pri 37sh C počas 15 -20 min., otáčaním hore nohami. Pri použití bumazhnyhindikatornyh poháňa živný agar dosku sušené disky donaneseniya sredy.Chashki na povrch média na stanovenie toxigénnosť obchod nerekomenduetsya.Prigotovlenie papier polosokPoloski filtračný papier nareže na veľkosť 1,5 cm x 8 cm, zabalené s 2 - 4 ks v sáčku a sterilizuje v avtoklavepri 0,5 MPa po dobu 30 minút. Tašky s papierovou poloskamihranyat v sterilnej Petriho miske o 3 vzorky nedel.Pered zastávok na toxigénnosť santitoksinom obsahu liekovky sa rozpustí v 1 ml sterilného fiziologicheskogorastvora, prenesie sa do sterilnej skúmavky a uviesť neydannye štítky (rozpustený antitoxín temperature4 skladované pri - 6SH C nepresahujúce 10 dní) , Filtračný papier obozhzhennympintsetom umiestnená do sterilnej Petriho misky. V každom poloskunanosyat antitoxínu 0,25 ml, obsahujúci 500 ME v 1 ml. Dlyaudaleniya prebytok sérum navlhčený pás aplikovaný ksterilnoy pohár viečko Petri.Pri pomocou antitoxický sérum (vmestoantitoksina) vyžaduje jeho riedenie až 500 ME 1 ml.Razvedenie Antitoxická syvorotkiSoblyudaya aseptickú techniku, Antitoxická perenosyatiz séra fľaštičky do sterilnej skúmavky. Na rúrku ukazujú dannyeetiketki a trvanlivosť. Skladujte sérum na 4 -6sh C.Syvorotka musí byť riedený sterilným obsahom fiziologicheskimrastvorom na 500 ME v 1 ml. Obchodné príprava mozhetimet inú aktivitu (5000 ME, 10000 ME, 20000 ME) a ​​razlichnyyobem.Naprimer v ampulke obsahuje 10000 ME (v objeme 4,8 ml, kakukazano štítok krabice s ampuliek) antitoxický syvorotki.Dlya zjednodušenie výpočtov, celkové množstvo séra môže byť sa za5 ml. V dôsledku toho, v 1 ml séra obsahovala 2000 ME (10000 ME: 5 = 2000 ME). Pre získanie 500 ME v 1 ml sleduet1 ml séra sa zriedi 4-krát, tj., na 1 ml séra dobavit3 ml sterilného fyziologického roztoku. Keď neobhodimostimozhno zriedeného séra do menších objemov: 0,1 ml syvorotkidobavit až 0,3 ml roztoku chloridu sodného alebo 0,2 ml syvorotkidobavit 0,6 ml fyziologického roztoku alebo 0,3 ml syvorotkidobavit 0,9 ml fyziologického roztoku a t. d.Razvedenie sérum môže byť vykonané iným spôsobom. Ak, napríklad, obsiahnuté v ampulke 5000 ME séra s objemom 2,5 ml, ME 500 je obsiahnutý v 0,25 ml séra. Do tohto objemu dobavlyayut0,75 ml sterilného fyziologického roztoku a sére poluchayutrazvedenie 500 ME 1 ml.Razvedennuyu séra môžu byť uložené po dobu 7 dní pri teplote temperature4 - 6SH C.POSTANOVKA PROBYKulturu osiate v "plakety" priemer 0,6 až 0,7 cm narasstoyanii 0,7 - 0,8 cm od seba a 0,5 cm od okraja poloskifiltrovalnoy papiera. Jedna šálka by sa mali pestovať nie viac ako 10 "plakety", Z nich, 6 "plakety" Skúšobné kultúry 4 -kontrolnogo kmeňa. Pri malé množstvo naočkovaného ispytuemogomateriala 6 kontroly "plakety" a 4 - predmety (Obrázok 1. *>). Šálky a siatie bola umiestnená do termostatu pri 37sh C .-------------------------------- *> Nie je privoditsya.Uchet rezultatovRezultat čítanie pri 18 - 24 a 48 hodín rosta.Sleduet potrebné chápať chtopreparatantitoksicheskoyprotivodifteriynoy sérum, okrem difteriynomuantitoksinu protilátok obsahuje protilátky proti antigénom vo formulácii mikrobiálnym vzorke kletki.Poetomu na toxigénnosť ispolzovaniemdannogo s drogami precipitátov môžu byť vytvorené nielen vrezultate spájajúcej toxín s antitoxínu (spetsificheskiepretsipitaty), ale aj v interakcii antibakteriálnych protilátok skomponentami Corynebaktérií buniek d ifterii (nespetsificheskiepretsipitaty). Ten môže byť vytvorený ako toxický, skreslil počet a riadiace napätie, a na netoksigennyhkorinebaktery záškrtu. Niekedy je výskyt mnozhestvennyhliny zrážok. Nešpecifické zrazeniny zvyčajne mierne, majú nezreteľné obrysy sa najčastejšie 48 -72 hodín, v ojedinelých prípadoch sa môžu objaviť na prvý sutki.Kriteriem posúdiť špecifickosť fúzie zrazenín je liniypretsipitatsii skúška kmeň s konkrétnou liniyamikontrolnogo toxigénneho kmeňa. V prípadoch, keď ukontrolnogo kmeň vytvorených niekoľko línií zrážanie, špecifický potrebné zvážiť presnejšie a čoskoro poyavlyayuschiesyapretsipitaty. Z tohto dôvodu, prezeranie vzorky šálky na toksigennostosuschestvlyayut po 18 - 24 hodín od okamihu jeho výroby. Ak vtechenie tentoraz z kontrolného kmeňa pretsipitatsiine vedenia sú detekované, predstavuje porušenie usloviypostanovki reaktsii.Varianty zhodnotiť odpoveď výsledkov: 1. Skúšobné kultúry Corynebacterium záškrt yavlyayutsyatoksigennymi pokiaľ tvoria zrážky linky zlúčiť iliimeyut tendenciu sa spojiť s príslušným kontrolným spetsificheskimiliniyami toxigénneho shtamma.2. Skúšobné kultúry Corynebacterium záškrtu yavlyayutsyanetoksigennymi ak: a) vedenie zrážok vytvorený testovací kultúra, chýba prítomnosť špecifických línií zrážok ukontrolnogo kmeňa B) líniu zrážok nemožno zlúčiť s spetsificheskimiliniyami ovládacím zrážanie kmeňa a prešiel alebo imeyuttendentsiyu kríženia s nimi (neidentické , nespetsificheskielinii) -c) riadkové zrazeninovú testovacie kultúra snespetsificheskimi linky zlúčiť kontrolného kmeňa-d) vyzrážanie testovacie línie kult URS sospetsificheskimi pretínajú a spojiť s nešpecifickú liniyamikontrolnogo shtamma.Ochischenny enzymatická hydrolýza a špecifické sorpčnou antitoxín neobsahuje protilátky na zložky mikrobiálnych buniek. Keď ispolzovaniietogo prípravu nešpecifické zrazeninovú línie nie obrazuyutsya.METODIKA toxický SVOYSTVKORINEBAKTERY STANOVENIE záškrtu INDIKATORNYHBUMAZHNYH disku s ANTITOKSINOMNa Petriho misky plochy s médiom pre mikrobiálne umiestnený opredeleniyatoksigennosti Záškrt indikátora kola sdifteriynym antitoxínu. Okolo každého disku 5 antitoksinomformiruyut "plakety": dva "plakety" - kontrolné kmeň a tri -ispytuemye (jedna analýza aspoň dva podozrivé koloniyamiformiruyut "plakety" z izolovaných kolónií a -z zmesi 3 - 6 koloniy- podobné obrázky z rovnakej analizamozhno uskutoční okolo druhej kotúčovou antitoxínu). všetkých päť"plakety" sú usporiadané symetricky okolo disku vo vzdialenosti 0,8 zmotať okraja. priemer každého "plakety" 0,8 cm. Na jednu šálku Petrimozhno až štyri disky protijed a respektíve 20 "plakety" kultúry. Šálky s posevamipomeschayut do termostatu pri teplote 37sh C.Rezultat reakcie čítanie na 18 - 24 hodín, a 48 hodín -prechádzajúce. Prítomnosť zrážok vedenie medzi santitoksinom disku a testovacie kultúra ukazuje eetoksigennosti. Štúdia považované za toxické kultúra, táto kultúra esliliniya zrážanie prechádza pod uhlom linieypretsipitatsii kontrolný kmeň. Nedostatok zrážok liniek uispytuemyh kultúry po 48 hodinách, ak majú kontrolnyhshtammov označuje žiadnu toxigénnosť majú izuchaemyhkultur. zrazeninovú líniu v kontrolných kmeňov dolzhnypoyavlyatsya po 18 - 24 hodín. Neskoršie vzhľad liniypretsipitatsii vyžaduje overenie živnom médiu kontrolu kvality ilizameny kontrolného kmeňa shtamma.Hranenie v laboratoriiDlya kontrola uloženia kmeňa v laboratóriu mozhnoispolzovat polotuhé agar séra pripraveného nabulone Martin alebo iné živnej pôde (pH 7,6). Udržujte vholodilnike opätovnú výsadbu raz za 2 - 3 mesiace. Polotekuté agarrazlivayut 8 ml skúmaviek a 1 ml hovädzieho syvorotkikrupnogo skota.Kontrolny toksigennyyshtammkorinebaktery záškrtu prevedení gravis získané v štáte Výskumnom ústave normalizácie ikontrolya lekárske a biologické preparatovim.L.A. Tarasevich. V štúdii na toxigénnosť nemožno použiť vkachestve riadenia, produkcia kmeň PW-8 a je nutné pravidelne varianty.Kontrolny kmeň pasážovania na krovyanomagare. Pre úspešné identifikáciu Corynebaktérií difteriikontrolny toxigénne kmeň subkultivovať každých 1 - 2 sutok.METODIKI DEFINÍCIE PRIZNAKOVOPREDELENIE TSISTINAZNOY biochemická aktivita (vzorka Pisa) Corynebacterium záškrtu a Corynebaktérií ultserans, unlikefrom lozhnodifteriynoy Hoffmann a ďalšie tyče korineformnyhbaktery vlastniť enzým tsistinazoy.Ispytuemuyu kultúra zaočkovaný slučky "bodnutie" . V pitatelnuyusredu pre stanovenie tsistinazy, vleje sa do úzkeho výšky probirkistolbikom 3 cm z živnej pôdy zloženia má cystínu octovú - kyselina vedenie. V priebehu rastu kultúra produtsiruettsistinazu, štiepiace tsistin- a vytvorené na etomserovodorod nechá reagovať s kyselinou octovou - kyselina olova, síry kotoryyprevraschaetsya - olovené - zlúčenina -Brown tmavej farby. Corynebacterium záškrtu a korinebakteriyultserans nielen spôsobujú černanie médiá počas vstrekovania, ale iobrazuyut temný mrak okolo neho - hnedá narasstoyanii asi 1 cm od strednej plochy. Reaktsiiuchityvayut Výsledky po 24 hodinách. V prítomnosti viacnásobné rastového dlyapolucheniya urýchliť reakcie (3 hodiny), kultivačné médium množstvo inokuliruyutbolshim. Súčasne ispytuemymikulturami, očkovanie sa vykonáva v kontrolnom kmeňom otdelnuyuprobirku.OPREDELENIE ureáza AKTIVNOSTILozhnodifteriynye Hoffmann coli, Corynebacterium ultserans inekotorye iných mikroorganizmov rodu Corynebacterium produkovať obladayutsposobnostyu počas rastu irasscheplyat enzýmu ureázy močoviny. Corynebacterium záškrt, ako schopnosť neobladayut.Probu ureázy môže byť v dvoch variantoch - podľa metoduZakse (a) a nanesením na živnej pôde s močovinou (b) .a) pre metódu ureázy Sachsa bez prípravy smeshivayut1 časti činidlá A a 19 dielov činidlá B. zmes sa vleje do 0,1 ml uzkieprobirki výrobu jednej slučky a testovať čistý kulturyso agare trubky alebo Pisa médiom. Pre reakciu vydachiuskorennogo v prítomnosti viacnásobné rastu na doske odnotipnyhkolony počiatočné naočkovaní kolónie nechá vnesenieneskolkih trubice ureázy jednu vzorku. Rezultatuchityvayut po inkubácii v inkubátore pri 37sh C počas 30 min.b) čistej kultúry Corynebacterium záškrtu v smochevinoy naočkuje vývaru, vleje sa do skúmaviek v 2 - 3 ml, a umiestni sa do inkubátora, výsledok po 24 hodinách inkubácie pri teplote 37sh C.Ferment ureasových štiepia iuglekisloty močoviny na amoniak. Tým sa zvyšuje pH prostredie a dochádza izmenenietsveta indikátor (začervenanie). Pri absencii tohto enzýmu issleduemoykultury, prostredie č farbenie proiskhodit.Rekomenduetsya súčasne ako samostatná, zasevatkontrolny shtamm.OPREDELENIE sacharolytické AKTIVNOSTIDlya identifikačné Corynebacterium záškrtu takzheotsenku použitie sacharolytické aktivita izolovaných kultúr pre sredahGissa sacharidov - sacharóza, glukóza, rozpustné krahmalom.Kazhduyu rúrky s médiom hiss sa naočkuje 1 slučky chistoykultury. Výsledok na 24 hodín a pri teplote otritsatelnomkrahmalnom znamenia - kyselina je vytvorená, je obnova odfarbí fuchsínu a sredapriobretaet karmínovej farby po 48 hodinách kultivácie plodiny vtermostate na 37sh C.Pre fermentáciou sacharidov. Odporúčaná stavitprobu súčasne s kontrolného kmeňa Corynebacterium záškrtu variantagravis.OPREDELENIE nitrátreduktasy AKTIVNOSTISposobnost Corynebacterium záškrtu obnovenie kyseliny soliazotnoy (dusičnan) v soli kyseliny dusitej (dusitany) je voliteľná funkcia, ktorá umožňuje differentsirovatkorinebaktery očkovacie kultúry ultserans.Proizvodyat rámci štúdie v skúmavke s nitratnymbulonom, inkubujú sa po dobu 24 hodín na 37sh C.Zatem pridaný 2 - 3 kvapky činidla na dusitan (Griessova iliKasatkina ). Keby tam bol vznik dusitanov, sredaokrashivaetsya červeno. Ak tomu tak nie je obladaetnitratreduktazoy mikroorganizmus, prostredie č odfarbenie proiskhodit.Odnovremenno so skúmavkami inkubovali kontrolnuyuprobirku sterilné sredoy.5. SredyKachestvo výživná kultivačné médium je dôležité pri lyubombakteriologicheskom štúdie. K dosiahnutiu maksimalnoyvysevaemosti Corynebacterium záškrt testovaného materiálu, je potrebné vytvoriť optimálne podmienky pre rast, etihbaktery zachovanie reprodukčného ich biologických vlastností, ako aj dlyaingibirovaniya sprievodný rast mikroflóry. To dostigaetsyaputem použiť univerzálne živné základne s dobavleniemkrovi a teluritu draselného. Draslík teluritu v opredelennoykontsentratsii neinhibuje rast zástupcov rodakorinebaktery a takmer úplne inhibuje rast médium sú postoronneymikroflory.Krovyanyetelluritovye takzhedifferentsialno - diagnostika ako koloniikorinebaktery na týchto médiách majú šedej alebo čiernej farby (tieto mikroorganizmy sú schopné obnoviť draselný teluritu dometallicheskogo telúr čiernej látky, a hromadia egovnutri bunky) .NPO "živná pôda", Makhachkala suhuyuhinozolnuyu vytvára rozdiel - diagnostický stredu Buchina dlyavydeleniya Corynebacterium záškrt, ktorý sa pripravuje na predpis naetiketke doplnenom 5% krvi (bez dobavleniesyvorotki miesto krvi). Buchina Streda horšie krovyanymtelluritovym stredy na inhibičnú aktivitu a koloniivozbuditelya záškrtu sa môže objaviť o deň neskôr ako nakrovyanyh telluritovyh prostredia. V posledných rokoch, Výskumný ústav prikladnoymikrobiologii (.. N Obolensky Moskovská oblasť) produkuje pitatelnuyusredu k izolácii Corynebacterium záškrt - korinebakagar.Odnako, v porovnaní s krvou telluritovymi prostredie dannoysrede rast v 2 - 3 krát menšie kolónie korinebakteriydifterii.Uchityvaya vyššie, napriek tomu, pitatelnymisredami najlepšie pre primárne očkovanie materiálu sú krovyanyetelluritovye médium. Ako základ pre tieto testovacie médium mozhnoispolzovat suchý živín (SPA) NPO"živná pôda" (Makhachkala) na živnom agarovom osnovepankreaticheskogo hydrolyzát, rybia múčka (RM) výroba GNIIPM (n. Obolensky). Živný agar sa pripravuje na predpis štítku iextempore pridá krv a teluritu kaliya.Dlya určujúce toxigénnymi vlastnosti Corynebaktérií difteriivypuskaetsya komerčné suché stredu OTDM (NGO "Pitatelnyesredy"..., Makhachkala) a GNIIPM (n Obolensky Moskovská oblasť) mediálnych dát pripravené predpis etiketke.Luchshey na základe prípravy vzoriek životného prostredia a pre opredeleniyatoksigennosti Pisa zostáva martinských peptón, kotoryygotovitsya v laboratóriu alebo v oddeleniach nutričnej srednekotoryh vedecký - výskum inštitúcie pre prigotovleniyaMartenovskogo agara.Dlya vypínacie kolónií a kultivácia Corynebacterium záškrtu vlaboratornyh podmienky pripraviť agar sére sredu.Primenenie sérum je zložený netseleso braznym.Kazhdaya nová séria kultivačného média (ako je komerčný iprigotovlennoy in vitro) podlezhitbakteriologicheskomu kontrolu. V prípadoch, keď živná pôda rostovyesvoystva nespĺňajú predyavlyaemymtrebovaniyam, živný agar báza pripraví bujón -suhoy živnej pôdy (SPB), vyrábaného firmou NPO "Pitatelnyesredy" (Makhachkala), časovanie bulonproizvodstvaGNIIPM (n Obolensky.) - vývar aminopeptidov pre mikrobiologické tseleyproizvodstva bitúnkoch (mesto St. Petersburg, Armavir, Stavropol,) a vývar, pripravené v laboratóriu (Hottinger štiepenie, peptón 1% vody, obsah aminnogoazota 150 -. 180 mg /%) živné pôdy na siatie počiatočné vrstve chashkamPetri naleje do 3 - 4 mm. Môžu byť použité v techenie3 dní pri skladovaní pri teplote PRÍPRAVA 4SH C.METODY A živnom médiu REAKTIVOVTRANSPORTNAYA médiá (médiá akumulácie) ako základ pre prípravu dopravy sredyispolzuyut 0,1% živného agarovej Hottinger stráviteľné alebo 0,1% agaru komerčný živné pôdy, pH 7,6.0,1% základnej agare sa naleje do skúmaviek v 4 ml sterilizuyutv autokláve pri tlaku 1 atm po dobu 20 minút. Doba skladovania - až 1 mesiac pri 4SH C. Pred použitím sa každá skúmavka ssoblyudeniem aseptickú techniku, sa pridá 0,5 - 1,0 ml syvorotkikrupnogo dobytka a 0,05 ml (1 kvapka) 2% rastvoratellurita draselného. Selektívna kontrolu prostredie sterility sa udržuje na 37sh C počas 48 hodín. Doba gotovoysredy - 10 dní pri 4SH C.ZHIDKAYA živného média za účelom VYHLÁSENIE RNGAS proti záškrtu toxínu indikácia RNGA materiál chashkipervichnogo siatie naočkované do skúmavky s kvapalným médiom syvorotochnoypitatelnoy pripravené na báze vývar Martin, ssoderzhaniem aminového dusíka vo výške 150 - 180 mg /% pH 7,6. Pitatelnyybulon vleje do skúmaviek v 3,5 ml, sterilizuje sa v autokláve pri1 atm. po dobu 20 minút. trvanlivosť - do 1 mesiaca. na temperature4sh C.Pered spotrebu každej rúrky vzhľadom pravilaseptiki pridá 0,5 ml séra HD i0,05 ml (1 kvapka), 2% roztokom telluričitanu draselného. Kontroliruyutna sterilné médium a uložené v rovnakým spôsobom ako primárny napoly kvapalný transportnuyusredu.SREDY siatie testovanom MATERIALASreda Clauberg IIK 100 ml sterilných agarových bázou (pH 7,6), roztaví a ochladí sa na 50sh C glitserinovoysmesi 10 ml, 50 ml "lak" Krv a 3 ml 2% roztoku teluritu v kaliya.Prinimaya si uvedomiť, že živné prostredie a zmes razvoditsyaglitserinovoy "lak" krv v 1,6 násobku danej médium priprigotovlenii by sa mal zvýšiť zváži suhogopitatelnogo agarové výpočet 1,6 raza.Primer. Štítok fľaše s agarom suchým kommercheskimpitatelnym obsahuje nadviažu potrebné pre prigotovleniyaodnogo liter média D. Pre príklad 30 Príprava 1 litrapitatelnoy základ pre médiá Clauberg II by mala brať navesku48 g (tj. 30 g x 1,6 = 48 g) .Pre potravinársky glycerín zmesi na 40 ml krvi alebo defibrinirovannoykrovi zmesi sa pridá 20 ml chemicky chistogosterilnogo glycerínu (glycerol sterilizuje pri teplote 110sh Savanorių Str dobu 30 min.). na prípravu "lak" Krv sterilnoydistillirovannoy na 34 ml vody sa pridá 16 ml defibrinované krovi.KROVYaNOY TELLURITOVY agarom (KTA) do 100 ml sterilných agarových bázou (pH 7,6), roztaví a ochladí sa na 50sh ° C, pridá sa 7 ml 10 mldefibrinirovannoy alebo hemolyzované krvi a 2 ml 2% roztok telluričitanu draselného. Namiesto toho, krv môže byť použitá suhuyutelluritovuyu zmesi (11 ml na 100 ml média), zatiaľ čo pri 100 mlKTA extempore pridajte 1 ml 2% roztoku telluričitanu draselného, ​​t.k.1 ml 2% roztoku obsiahnutá už v 11 ml krvi telluritovoysmesi. Ak vezmeme do úvahy, že živná pôda razvoditsyakrovyu asi 1,1 krát, v príprave strednodobej sleduetuvelichit vážil živnom agare výpočet suché 1,1 raza.Primer. Štítok fľaše s agarom suchým kommercheskimpitatelnym obsahuje nadviažu potrebné pre prigotovleniyaodnogo liter média, napr., 30 F. Na prípravu 1 litrapitatelnoy základu pre CTA musí vzorku 33 g (tj. 30 g x1,1 = 33 g) .METODIKA PRÍPRAVA KROVYANYHI KROVYANO - TELLURITOVYH SMESEYDlya príprava živných médií najlepších ispolzovatdefibrikirovannuyu krvi zvierat - hovädzí dobytok, kone, ošípané, ovce, králiky. Krv bola odobraná v sterilnyesosudy s korálkami pomocou špeciálne namontovaný systém asepticky. V niektorých prípadoch bola odobratá krv, nemontiruya špeciálne systémy, zlúčenie prvé krvnej múčky použitie vnebutyli.Mozhno ľudskej krvi platnosti (citrát a konzervačné látky) prípravu neho spetsialnyekrovyanye zmesi. K tomu je nutné odstraňovať kvapalný chastotstoyavsheysya krv obsahujúce citran sodný a konzervačné látky. Košťany erytrocyt hmotnosť v nádobe pridať sterilnyyfiziologichesky roztok, ktorý môže tiež odstrániť posleosedaniya erytrocyty, a pridá sa destilovaná voda dopervonachalnogo obema.Horoshim syremdlyapolucheniya zmesi krvi sluzhiteritrotsitarnaya hmoty, ktorá môže zostať pri proizvodstvegammaglobulina a ostatné produkty z krvi. K erytrocytov massedobavlyayut sterilnej destilovanej vody pri rýchlosti 1/3 obemaeritrotsitarnoy massy.Mozhno aj pomocou krvných zrazenín zostávajúce posleserologicheskih reakcie (s negatívnym výsledkom reakcie), zrazeniny alebo abortnoy placentárnej krvi. Vsterilnye zrazeniny zbierať fľaše s sklenených perál a rozbitého skla a potom sa zmrazí a rozmrazia a potom zráža ľahko razbivayutsyabusami. Tento postup je možno opakovať 2 - 3 krát. Potom dobavlyayutsterilnuyu destilovaná voda v pomere 1/4 objemu krvi zmesou sgustkov.V pripravených vyššie uvedeným spôsobom, telluričitanu draselného sa pridá ako konzervačný prostriedok. Pre každý 10 mlkrovyanoy zmesi sa pridá 1 ml 2% roztoku telluričitanu draselného. Takuyukrovyano - telluritovuyu zmes sa môže skladovať pri 4SH C výpočte w2 mesyatsev.Primer. Pokiaľ nie je supernatant citrátovej krvi obemom250 ml 50 bola odstránená - 60 ml kvapalného podielu, potom neobhodimodobavit rovnaký počet - 50 - 60 ml sterilnogofiziologicheskogo riešenie, opäť sa premieša nechá sa stať, načo odstrániť 50 - 60 ml tekutej časti, a 50 - 60 mlsterilnoy destilovanej vody. Bude teda polucheno250 ml krvi zmesi. Je nevyhnutné, aby ochrana dobavit25 ml 2% telluričitanu draselného (pre každý 10 ml krvi smesipribavlyayut 1 ml 2% telluričitanu draselného) .V ďalšom v príprave krvných telluritovoy sredyna každej bolo pridané 100 ml živného agaru 11 ml krovyanoytelluritovoy zmesi (10 ml zmesi krvi a 1 ml rastvoratellurita 2% draslíka). Extempore v takom médiu sa ďalej pridá 1 ml 2% roztoku kaliya.Prigotovlenie teluritu roztoku teluritu kaliyaDlya telluritovyh média použitého pripravený kommercheskiy2% roztok teluritu kaliya.Pri neprítomnosti komerčne dostupného roztoku teluritu kaliyagotovyat nasledujúcim spôsobom: 100 ml destilovanej vodyrastvoryayut 2 g telluričitanu kryštalický draselného. Pre sterilizatsiirastvor nahriateho vo vriacom vodnom kúpeli po dobu 30 minút. a udržať pritemperature 4shC. Kryštalická draselná teluritu hranyatgermeticheski uzavretý bankové tmavo agar stekla.SYVOROTOChNY AGARSyvorotochny použitý pre skríning kolónií ikultivirovaniya Corynebacterium záškrtu, môžu byť pripravené love dostatočne vyššie živiny osnov.K 100 ml roztaveného a ochladí sa na teplotu 50sh Cpitatelnogo agaru (pH 7,6) sterilný 10 ml syvorotkikrupnogo dobytok. Reakčná zmes sa mieša, naleje vsterilnye rúrky na 4 - 5 ml, a nastaviť ich do naklonnompolozhenii na sklonu každú dávku kotorogoproveryaetsya sterility. Niekoľko trubice sú umiestnené v noci termostatu. V prípade klíčenie médiá je zamietnutá všetky zrazenú v sére agarovej partiya.Probirki uložené na 4SH C w2 nedel.MARTENOVSKY agar VODOYDVOYNOY KONTsENTRATsIIMartenovsky peptón z mäsa - 0,5 l, mäso voda - 0,5 l, agar -agar - 15 g kyseliny octovej - kyselina sodný - 5 g, maltóza - 3 g.15 g agaru premyje počas pracovný deň protochnoyvodoprovodnoy vo vode, odstredí a opatrne prenesená do 1 lmartenovskogo bujónu (0,5 l nístejová peptón a 0,5 l myasnoyvody). Upravený pH 7,8 - 8,0 alkalizáciou bulona20% roztok NaOH na papier s červeným indikátorom kresol, ktorý pri tejto reakcii, sa mení farbu na žltú ružové -malinovy. Medium sa zahrieva pod spätným chladičom počas 10 minút. potom 0,5% (5 g na 1 liter) octovej - kyselina sodný, 0,3% maltózy (3 g na 1 liter), pH sa kontroluje a, ak je to nutné, sa znova upraví na 7,8 - 8,0, vyhrievaný . vtechenie 15 minút, nechá sa stáť na teplom mieste (vo vozidle Koch termostatu) 2 - 3 hodiny a filtruje sa cez bavlnenou látkou alebo -marlevy filtra. Plní sa do sterilných fľaštičiek (70 - 80 ml) pribolshom záťaže alebo rúrok (10 ml) a sterilizuyutodnokratno prúdiacej pary 30 min.Martenovsky peptonSvinye žalúdkov, najlepšie spárované s elastickými stenami, veľkého množstva hlienu a príznakov prechladnutia bez čistenej otzhira (žalúdkov napustené žlč odstráni), strih iizmelchayut mlynček. Výsledný mleté ​​žalúdka umiestnený vbutyli kapacita 3 - 5 litrov a zahrieva na naliať 50sh C vodoyiz, vztiahnuté na 1 liter vody, 300 až 500 g rozomleté ​​hmoty. Tam zhedobavlyayut 1% chemicky čistá kyselina chlorovodíková (špecifická hmotnosť 1,19). Hmotnostné dobre premieša a dať do termostatu, a to buď na 15 -18 hodín (alebo viac) v 37sh C-, alebo, ak je na otdelnogotermostata 42sh C, 18 hodín (alebo viac). Počas protsessaperevarivaniyabutyl třepaných najprv častejšie (po 1 až 1,5 hodín), potom sa menej často. Dobre štiepi peptón butylilezhit malé spodnou vrstvou jemných tmavých osadka.Polnotu depozície balastných proteínov môže zistiť putemdobavleniya k 5 ml filtrovanej peptónu 1 - 2 kvapky 10% roztoku hydroxidu sodného, ​​zákal nesmie poyavlyatsya.Deystvie enzým sa zastaví zahrievaním vo vodnom kúpeli, postupne uvedenie teploty na 80sh C, popokazaniyu stanovená s teplomerom ponorený vo fľaši perevarom.Nagrevanie pokračuje po dobu 10 minút. Pre tento účel je zariadenie mozhnoispolzovat Koch alebo autokláve. Tschatelnovzbaltyvayut fliaš, uzavrie bavlnené gázy - s bumazhnymkolpachkom zátkou a dať na suchom a chladnom mieste pre otstaivaniyapri teplote nie vyššej 12SH C Peptón použiteľné neranee ako 7 dní, kedy usadiť tesne suspenduje chastitsy.Neobhodimo pridá 20 ml chloroformu, 1 l peptónu dlyakonservirovaniya a uzavrite fľašu s gumenou zátkou. Tento videpepton možno skladovať bez sterilizácie pri izbovej temperature.Myasnaya vodaDlya varenie mäsa vody dvojitého spojenia zhelatelnoispolzovat čerstvé mäso mladých zvierat upitannosti.Obezzhirennoe média zbaveného mäsa šľachy prešiel cherezmyasorubku, naliať vodu do 1 litra vody na 1 kg mletého iostavlyayut cez noc pri teplote 4SH C, reakčná zmes sa zahrieva na teplotu ráno asbestovoysetke dobu 15 - 20 min. od okamihu varu. Pripravený otvarfiltruyut, mleté ​​vyčerpaný, výsledný mäso sa naleje vsterilnye fľašu s vodou, 250 - 500 ml a sterilizuje tekutiny parom3 po sebe nasledujúcich dní, 30 min. Skladované pri 4SH indikátor C.Bumazhki krezolu krasnyy0,1 g kresol červenej sa rozpustí v 100 ml 95% alkoholu pri iostavlyayut 37sh C počas 24 hodín, často za trepania. Deň dedičstva sa zvlhčí v roztoku filtrovalnoybumagi prúžky a rýchlo vysuší. Jasné - žltá farba papiere v schelochnoysrede prebieha v rôznych odtieňoch krasnogo.SREDY STANOVUJÚCE TSISTINAZNOY AKTIVNOSTISreda Pisa na OHF agareK 90 ml roztaveného 1,5% agaru OHF (Neprípustné použitie Hottinger agar), pH 7,6, dobavlyayut2 ml 1% roztoku L -tsistina roztok 0,1 N kyseliny chlorovodíkovej (HCl), dôkladne mieša a rovnaký objem 0,1 N rastvoraNaOH k neutralizácii kyseliny. Kyslé a alkalické roztoky dolzhnybyt vzájomne titrované, ispolzovatfiksanaly môžu byť produkované chemickými promyshlennosti.Sredu sterilizované pri 112sh C počas 30 minút, skladovaných po dobu 1 mesiaca pri teplote 4SH C.Agar s cystínu topí pri 90SH C (médium nie je variť -. Dlyasohraneniya cystín). K ochladenej médium pridanej 45sh C 1 VM 10% roztok octanu olovnatého a 9 ml séra hovädzieho dobytka krupnogorogatogo asepticky a balená poprobirkam.Neobhodimo Všimnite si, že keď je teplota 50sh C a vyššie, v prítomnosti octanu olovnatého a zatiahnuté sredapriobretaet sérum mliečnu farbu. Je ťažké účet rezultatovreaktsii.Sreda Pisa báze komerčné prostredie AGVDlya Pisa varenie médium môžu byť k dispozícii na zloženie obchodného isbalansirovannuyu AGV médium používané vbakteriologicheskoy postupov na určenie chuvstvitelnostimikroorganizmov na antibiotiká. Odvážené časť suchom prostredí AGV vkolichestve 2,7 g sa vloží do 90 ml destilovanej vody a zahreje doee úplného rozpustenia. Pripraví sa 5% natriya.Dlya hydrogénuhličitanu sodného sa rozpustí 0,5 g hydrouhličitanu sodného v 10 ml destilovanej roztoku vody.Zatem sa pridá k 0,1 g L-cysteínu a zahrieva na polnogorastvoreniya cystín. Potom sa pridajú 2 ml vriacej alkalických rastvoratsistina zavedená do 90 ml roztavenej strednej AGV, pH sa upraví, a sterilizuje sa pri do7,6 112sh C počas 10 minút. Do roztaveného iohlazhdennoy 45sh do C cez postupne pridá: 10 mlsyvorotki dobytok, 1 ml 10% rastvorauksusnokislogo olova, čerstvo pripravené 1,5 ml sterilného 10% roztoku tiosíranu sodného a vleje sa do probirkam.Rastvory octanu olovnatého a tiosíranom sodným gotovyatextempore sterilných skúmaviek a destilovanej vody sa sterilizuje prúdiacej pary, alebo vo vodnom kúpeli po dobu 30 min.Danny variantsredy Pisa otsutstviiMartenovskogo používané v agare. Odnakoneobhodimouchityvat, chtodifferentsialno - diagnostické vlastnosti tohto prostredia comparisonwith médium pripravené na agarovom OHF menej vyrazheny.SREDY STANOVENIE ureázy AKTIVNOSTIProbu ureázy môže byť v dvoch prevedeniach: Metóda Sachsa Iput naočkovaní živnej pôdy sa mochevinoy.Prigotovlenie opredeleniyaureaznoy činidlami za činnosť metóda ZakseGotovyat činidlo 2 - a a V.Reaktiv a: močovina 2% etylalkohol G96 2 mlDistillirovannaya 4 mlReaktiv voda B: 0,2% roztok fenolrot 1 mlOdnozameschenny fosforečnan draselný (KH PO) 0,1 r2 4dv substituovaný fosforečnanu draselného (K HPO) 0,1 gHlorid sodný (NaCl) 2 40,5 gDistillirovannaya voda100 mlReaktiv A nie je sterilizoval a skladovaný pri 4SH C.Reaktiv Takto spracovaný tekutý parom.Bulon mochevinoyK s 100 ml sterilného mäsa - alebo peptón Hottinger vývar (pH 7,0) sa pridá 1 g močoviny, a 0,2 ml 1,6% alkohol rastvoraindikatora krezolrot. Vleje sa do 2 - 3 ml sterilných skúmavkách sterilizované prúdiacej pary po dobu 10 min.SREDA STANOVENIE sacharolytické AKTIVNOSTIDlya určujúci sacharolytické aktivitu rekomenduetsyaispolzovat médium 1% peptón vode.K bolo pridané 100 ml horúcej destilovanej vody, 1 g peptónu, 0,5 g chemicky čistý NaCl, a indikátor 1 ml Andrede.Ustanavlivayut pH 7,4, varí po dobu 5 min., prefiltruje cez papierový filter ilipolotnyany, nastaví na pôvodný objem goryacheydistillirovannoy vody. K tomuto roztoku sa pridá jeden základ izuglevodov sacharóza, glukóza (1 g), škrob (0,5 g) .Among vleje do skúmaviek v 2 - 3 ml a sterilizuje tekuchimparom po dobu 3 dní na 30 minút. alebo pri 0,5 atm. 30 min. Gotovyesredy indikátor Andred sú bezfarebné alebo slabo rozovatyyottenok.Indikator AndredePosuda pre prípravu indikátora musí byť suchý, chemicky čisté, s pozemné probkoy.K 100 ml destilovanej vody sa pridá 0,5 g kyseliny fuksinai 16,4 ml 4-percent roztoku hydroxidu sodného. Riešenie pre jednodňové ostavlyayutpri 37sh C, občas trepanie, dva dni udržuje Nasva a potom sa odstráni na tmavom mieste. Čerstvo pripravený rastvorimeet slamy - žltá alebo slabo ružový odtieň, kotoryyischezaet počas skladovania. Keď intenzívne - ružová okraskerastvora počas indikátor varenia musí dobavitesche 1,6 ml 4-percentný roztok NaOH.SREDA STANOVENIE nitrátreduktasu AKTIVNOSTIK 100 ml živného média (BCH alebo Hottinger vývar), pH 7,3 - 7,5, bez dusitanov (kontrola Grissaili Kasatkin činidlo) sa pridá 0,1 g voľnej nitratakaliya dusitanu (KNO). Skontrolujte, či opäť dusitanov po32 ml a rozdelí v chemicky čistej, suchej skúmavke. Médium bolo sterilizované 15 min.pri 120sh C.Reaktiv GrissaRastvor 1: 0,8% kyseliny sulfanilovej v 5N kyseliny octovej kislote.Rastvor 2: 0,6% alfa-dimetyl-5N uksusnoykislote.Pered naftalamin pri plnení reakčnej zmesi rovnakých objemov roztokov 1 a 2. činidlo vhodné pre použitie po dobu 15 minút, vo forme bezfarebné, pripoyavlenii ružové sfarbenie. - nepoužiteľný. Roztoky 1 a 2 hranyatpri 4SH C počas 2 mes.Reaktiv KasatkinaRastvor 1: 0,1% roztok v destilovanej Rivanol vode.Rastvor 2: 12% roztok kyseliny chlorovodíkovej (HCl) .Pred prevedením reakčnej zmesi rovnakých objemov roztokov 1 a 2. činidlo Goden pre použitie v rámci 15 minút. Roztoky 1 a 2hranyat pri 4SH C počas 2 mes.RETsEPTY KRASOK1. Alkalické metylénová modrá Lefflera.Distillirovannaya ML1 99% vodný roztok hydroxidu draselného (KOH), roztok 1 VM 10% alkoholu metylénovej modrej 30 mlSmeshat. Škvrny po dobu 1 - 2 min.2. Octová siniy.Toluidinovy ​​toluidínová modrá gLedyanaya octová kislota2 0,5 ml96% etylalkohol 5 100 mlSmeshat mlDistillirovannaya vody. Škvrny na 3 - 5 min.3. Kryštálová violeť fioletovyy.Kristallichesky r5 0,25% roztok kyseliny octovej 100 mlSmeshat. Filtruje. Škvrna na 5 - 7 min.METODY CONTROL živnom SREDBakteriologicheskomu kontrolný orgán pervichnogoposevamateriala média a médium pre stanovenie vzniku toxických, sacharolytické a biochemických vlastností. Pri výrobe sredvazhnym moment je predbežný kontrolný médium nasoderzhanie amínové bázy azota.METOD kvantitatívne stanovenie metódou AMINO AZOTAPrintsip je založený na blokovanie formaldehyd pri pH7,0 voľných amínov a alkalických titračnej ekvivalentnogokolichestva karboxylových skupín. Začínať a končiť titrovaniyaopredelyayut potentsiometricheski.Reaktivy: 1. hydroxid sodný (NaOH), 0,1 N rastvor.2. Kyselina chlorovodíková (HCl) 0,1 N rastvor.4. Formalínu (40% roztok formaldehydu). Pred kazhdymopredeleniem nevyhnutné úprave pH na hodnotu formalínu 7,0.Hod opredeleniyaDlya analyzuje dané množstvo kvapalného vzorky. Dlyazhidkih hydrolyzátov s nízkym stupňom štiepenia (0,1 - 0,2% dodecyldimetylamínu dusíka) - 3 ML s priemerným stupňom lomu (0,3 -0,6% aminoxidu) - 1 ml- s vysokým stupňom drvenia (0,7 -1,3% aminoxid) - 0,5 ml-kvapalnej kultúry média (0,08% -0,04 amínový dusík) - 3 ml-kvapalina extrahuje (0,02 -0,04% aminoxidové) - 10 ml.V kadička 50 ml skúšobnej vzorky a aby objem dovodyatobschy destilovanej vody na 20 ml. Elektrodypotentsiometra ponorí do testovaného roztoku a pHrastvora sa upraví na 7,0 s 0,1 N NaOH 0,1 N rastvoraHCl alebo roztoku. Potom sa pridajú 2 ml neutrálnym formalínu a zmes sa mieša bez odstránenia elektródy, obsah vo vzorke sa titrujú 0,1Nrastvora NaOH na pH 9,1. V titrácii by ispolzovatmikrobyuretku 5 ml.Soderzhanie dusíka aminoskupiny vo vzorke v% (x) sa vypočíta podľa vzorca: A x K x 1,4 x 100X = ----------------- , gdeB x 1000A - počet roztoku 0,1 N NaOH v ml, ktorá bola k titrovanieissleduemoy vzorky k - korekcia na titer 0,1 N NaOH 1,4 riešenie - množstvo aminového dusíka v mg, čo zodpovedá 1 ml roztoku hydroxidu sodného, ​​100 0,1Nrastvora - konverzný faktor v záujme-B - množstvo kvapalného vzorky v ml prijatých pre analýzu-1000 - koeficient konverzie mg g.METOD bakteriologických CONTROL živnom SREDV praktické laboratória zhdaya šarže kultivačné média, najmä pri použití novej základne (ililaboratornogo priemyselnej výroby) a nových prísad podlezhitbakteriologicheskomu kontrolu vzhľadom k ich možnému nestandartnosti.1. Kontrola kvality médií pre siatie primárne issleduemogomateriala nastavenú stanovenie: a) klíčenia buniek Corynebacterium záškrtu-b) Doba do tvorby kolónií) ingibiruyuscheyaktivnostiv rešpektovať soputstvuyuscheymikroflory.S používané na tento účel riadiace jedovatý kmeňa ilisvezhevydelennye jedovatý kultúry Corynebacterium Záškrt stipichnymi kultúrne - morfologické vlastnosti shtammzolotistogo aureus (музейный или свежевыделенный).Суточные культуры коринебактерий дифтерии и стафилококка,вы ращенные на сывороточном агаре, смывают физиологическимраствором. Мутность полученной суспензии должна соответствовать10 ед. оптического стандарта мутности ГИСК им. Los Angeles Тарасевича(условно 1 млрд. бактериальных клеток в 1 мл взвеси). Из исходныхвзвесей культур коринебактерий дифтерии и стафилококка готовятпоследовательные разведения вфизиологическомрастворе(см. схему).СХЕМАПРИГОТОВЛЕНИЯ РАЗВЕДЕНИЙ КУЛЬТУРЫ КОРИНЕБАКТЕРИЙДИФТЕРИИ И СТАФИЛОКОККА+-----+-----------+---------------------------+------------------+| N | Кол-во | Объем вносимой | Условное кол-во ||про- | физиол. | суспензии, мл | микр. клеток ||бирки| р-ра, мл | | в 1 мл взвеси |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 8 || 1 |1,0| 1,0 из исходной взвеси| 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 7 || 2 |4,5| 0,5 из 1-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 6 || 3 |4,5| 0,5 из 2-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 5 || 4 |4,5| 0,5 из 3-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 4 || 5 |4,5| 0,5 из 4-й пробирки | 5 x 10 |+-----+-----------+---------------------------+------------------+| | | | 3 || 6 |4,5| 0,5 
Delež v družabnih omrežjih: 

 
Podobno
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.
» » » Zdravotnícke právo: právo, dokumenty, úlohy, pravidlá, akty.