Techniky

Testovanie náčinie a zariadenia pre odber telesné tekutiny (Nechiporenko, 1999)

Algotest ku kvantifikácii biologickej aktivity chemických zlúčenín (Barashkov, Kiristaeva 1977)

Príprava vzoriek na analýzu viacprvkové metodických pokynov Ruskej federálnej Sanitárne kontrolného strediska Muk 4.1.1483-03

metóda Formulácia stanovenie olova v krvi zriedením ICP-MS izotopu (Paschal et al., 1995)

Spôsob viacprvková analýza krvných frakciách

sulfo Stanovenie Zlúčeniny (Prebsting a Gavrilova Timofeeva modifikácie metódy stanovenia aktivity N-acetyltransferázy) (Pershyn 1971)

Testovanie náčinie a zariadenia pre odber telesné tekutiny (Nechiporenko, 1999)

Testovacie nádoby (skúmavky, skúmavky), injekčné striekačky typu "motýlie" systémy (plastové striekačky a skúmavky).

1. Rozpúšťadlo: zmes 1% HNO₃ a 0,001% Triton X-100. Pripraví sa za použitia destilovanej vody. 10 ml kyseliny dusičnej₃ (Reagent grade) sa pridá k 500 ml čistej vody v odmernej banke 1 liter. Potom sa pridá 1 ml Triton X-100. Po rozpustení sa objem zmesi sa upraví na 1 liter.

2. Pre testovanie plastových injekčných striekačiek, kontajnery, kapiláry vo vnútri objektu je vyrobená a 1 ml rozpúšťadla, je prenesené na testovacej skúmavky. V prípade, že sa roztok udržiava vo vnútri nádoby obráteného pre krycie alebo zásuvky pre 12-14 hodín. V prípade skúšobných kovových ihiel prechádzajú 1 ml roztoku. Potom všetky analyty individuálne testované na obsah kovov.

3. Všetky výpočty boli vykonané na 1 ml roztoku. Celkový obsah celkového kovu vo všetkých zariadeniach by nemal prekročiť 5% priemerného ekvivalentného vypočítanej hodnoty obsahu kovu v biologickom vzorky.

Algotest ku kvantifikácii biologickej aktivity chemických zlúčenín (Barashkov, Kiristaeva 1977)

V certifikáte nižšie popísané vynálezca № 557098. získané v algotest 1977 g. Aj keď technicky, táto metóda nie je príliš zložitá, je nutné splniť niekoľko podmienok, najmä s cieľom zabezpečiť prítomnosť lyuminostata (Continuous žiarivkové osvetlenie žiarivky s intenzitou 3700 J / cm² sec, inkubačná teplota 29 ± 3 ° C) a majú skúsenosti s riasami.

Test mezofilné organizmom je kmeň zelených rias Chlorella pyrenoidosa 82 zo zbierky kaviarní. MsÚ mikrobiológie. Pestuje sa 3 dni za stáleho svetla, žiarovka s intenzitou z 10. januára⁵ erg / cm² s pri 28 ° C plne Tamiya prostredie močovina a dodal: mikroelementy v Arnon-4 roztoku.

Pred experimentom riasy buniek (mid-log fáze rastu) je oddelená od média centrifugáciou (3 tys.ob / min, 1200g, 5 min), premytá 0,01% sodnej soli NaCl a zriedený 5 krát Predpoklad-1 média s pH asi 7,0, je úplne bez organických prísad.

Optimálna koncentrácia rias buniek pre maximálnu citlivosť (máj 10⁵ - 10.apríla⁶/ Ml), čo zodpovedá 15-40 jednotiek "index silikagélu" (SP), ktorý sa rovná hmotnosti suspenzie v CSC pyrogenního oxidu kremičitého mg / ml s rovnakým optickej hustoty pri 578 nm sú riasy suspenzie.

Pri hodnotení toxicity látok alebo ich zmesí, sú možné varianty týkajúce sa rozpustnosti testovaných látok. Vo vode rozpustné látky sa zavádza do suspenzie v koncentráciách, ktoré sa líšia o jeden rád, napríklad, 10, 1, 0,1, 0,01 mg / ml. Vo vode nerozpustné látky vo sverhrastvoritele podávaná, napríklad dimetylsulfoxidu (DMSO) alebo dimetylformamidu (DMF). Koncentrácia Sverhrastvoriteley by nemal v dôsledku ich inherentnej toxicity vyšší ako 3%.

Varené experimentálne a kontrolné s rovnakým začiatočným hnojovice SP₍₁ vleje sa do 2025 ml so širokým hrdlom bankách alebo Erlenmey-EPA (50-100 ml), alebo v štandardných skúmaviek do stojanov transparentných, uzavretá bavlny a inkubované pri 85-95 lyuminostate hodinu. Technicky pohodlné a vyhovujúce pre štatistické spracovanie opakovať každé možnosti 5-násobne.

Po inkubácii banky (alebo rúrky) sa umiestni v kúpeli z ultrazvukovej čističky a spracováva ultrazvukom za 10-15 sekúnd so 100 W, čím sa získa homogénna suspenzia. Definujú JV skúsenosť a ovládanie (JV_K) Pomocou absorbancie pri 578 nm (alebo počet buniek). Výpočty vykonané podľa vzorca:

kde% T₂ - percentuálna zmena kultúry zdvojnásobenie doby. Pozitívny výsledok ukazuje na prítomnosť zakrpatený rast a toxický účinok, negatívne - stimulačný účinok.

Kritická koncentrácia (C_cr) Sú graficky. Os úsek predstavuje vypočítanej hodnoty% T₂ (Nad 0 - pozitívne, nižšie - negatívne) a na osi x - koncentrácia testovanej látky na logaritmickej stupnici. Umiestnite priesečník úsečky medzi bodmi s väčšou a menšou hodnoty% T₂ 5% hladine, rovnobežne s osou úsečkových udáva hodnota K_cr- 5% je prijímaný ako kritickú úroveň vzhľadom na to, že niektoré látky, nespôsobujú jasný stimulačný účinok, a znížiť pod 5 zvyšuje relatívna chyby pri stanovení.

Veľmi vhodné vyjadrenie Výsledkom je, okrem K_cr, Príklad výpočtu toxicity vzhľadom k toxicite síranu meďnatého na "Tox" (T_s), Identifikovaný v tej istej série pokusov: T_s = K^s_cr/ K_cr. Voľba ako štandard modelu toxicity CuSO₄ vzhľadom na to, že tento materiál spĺňa tieto dve požiadavky: 1), že je najviac ako model fluóru a 2) poskytuje jasnú hodnota K^s_cr minimálny rozdiel medzi toxickými a stimulujúcich koncentráciách.

POTE: Od javov selektívne toxicita, to znamená, že univerzálny testovacie organizmy neexistujú. Známych testov, ako je test s dafnie, na základe stanovenia LD₅₀, že prakticky umožňuje nastaviť kritickú koncentráciu testovanej látky, tj vyššieho organizmu, ktorá je nevyhnutná činnosť inhibovaná. Okrem toho, že skúšobným organizmom pre experimenty by mali byť v štandardnom fyziologickom stave v každom ročnom období. Táto požiadavka je najvhodnejší pre jednobunkové zelené riasy.

Použitie mezofilných kmeňov Chlorelly umožňuje zvýšenie citlivosti Biotest v porovnaní s akoukoľvek inou o viac ako o dva rády, veľmi jednoduchým spôsobom. Pre-kmeň pestuje v úplnom médiu s močovinou, ktorý je mezotrofní. Bunky boli potom premyté bez média a presunutá do chudobné autotrophic podmienky, že sa podrobí dvojité fyziologické šoku.

Potreba zaviesť vnútorný štandard toxicity vychádza z neschopnosti vykonávať experimenty v rôznych ročných obdobiach za rovnakých podmienok. K^s_cr To sa líši od experimentu experimentovať, ale vo väčšine prípadov je približne 3 mg CuSO₄/ L.

Príprava vzoriek na analýzu viacprvkové metodických pokynov Ruskej federálnej Sanitárne kontrolného strediska Muk 4.1.1483-03

Na prípravu vzorky pomocou ICP-MS, ktoré majú byť použité riadu fotoplastikovou dôkladne premyté v ultrazvukovom kúpeli zriedenej 1: 1 HNO₃ a premyje sa trikrát deionizovanou H₂O.

Výber, skladovanie a príprava vzoriek

vlasy pripnúť k zadnej časti hlavy vo výške >0,1 g, sa nechá reagovať s acetónom po dobu 10-15 minút, premyté 3-krát deionizovanou H₂ach.

nechty rezať oboma rukami a spracované rovnakým spôsobom. Oba objekty sú uložené v papierových obálok.

krvný od ulnárny žily v množstve >1 ml uložené v chladničke po dobu 3-5 dní alebo v mrazničke (18 ° C) alebo mrazom. Pre dlhodobé skladovanie sa vzorky sa umiestnia do jednorazových polypropylénových skúmavkách s pevnými viečkami.

Podobne, spracuje krv pre prípravu liečiv balené červené krvinky, plazma a sera, a vzorka mlieko, spermie, lymfa, sliny.

moč (Ráno alebo denne) v množstve, ktoré je najmenej 5 ml sa umiestni do uzavretej plastovej nádobe v chladničke až 3 dní, alebo mrazené.

biopsia sval, koža, epiteliálne, pečeň, a ďalšie. bezprostredne po príprave sa zváži, umiestni do utesnené plastovej misky a ponechá sa v chladničke počas 3-5 dní alebo v zmrazenom stave.

Vzorky kostí a zubov bol umiestnený v plastovom obale z laboratória.

prípravky aminokyseliny, multivitamínov, BAS a suroviny na ich výrobu je v výrobcu balíčku. Minimálna hmotnosť 10 g pevných prípravkov, kvapaliny - 100 ml.

Otvorená rozklad vzoriek

Vlasy, nechty a ďalšie. Tuhé vzorky. Časť vzorky umiestni do valca teflónové bolo pridané 0,2-1,0 ml koncentrovaného HNO₃, ochranný kryt laboratórne fólie a umiestni sa do termobloku na 0,5-1,0 hodín pri teplote 115 ° C až do úplného rozpustenia. Rozpustený vzorka sa kvantitatívne prenesie do meracej trubici a premývanie vodou sa upraví na objem 10 ml, potom - na analýzu.

Video: Max OT. tréningové metódy

kvapalné vzorky. Presne odvážené vzorky (0,1 až 0,5 ml) sa umiestni do valca z teflónu, stanovením hmotnosti skúmaviek rozdiel hmotnosti pred a po príprave vzorky. Bol pridaný 0.3-1.0 ml koncentrovaného HNO₃ a homogenizovaná vzorka, ako je popísané vyššie.

Aby sa zabránilo ukladanie proteínov a kompenzáciu pre vzorky s vysokou viskozity nemá jednoduché zriedení vzorky s deionizovanou vodou s následným okyslením faktorom riedenia aspoň 1: 100.

mikrovlnný rozklad

Presne odvážený vzorka sa umiestni do teflónovej vložke, 5 ml HNO₃ a dať do mikrovlnnej rúry. Rozklad sa vykonáva u výrobcu programu (zvyčajne 5 minút pri teplote 200"C) sa kvantitatívne prenesie do skúmavky a objem bol upravený vodou na 10 ml. Vzorka s objemom 1 ml sa upraví na objem 10 ml 0,5% HNO₃ a analyzovaný.

Nemá priamy výber alikvotnej časti rozkladá objemu vzorky 0,1-0,5 ml. Pre kompenzáciu chyby pred rozkladom zriedením vzorky zavedeného ako vnútorný štandard (V, Rh) Ku koncentráciu analytu v konečnom roztoku bola asi 10 g / l. Roztok vnútorného štandardu by mal byť pridaný do všetkých jednotlivých a kalibračných roztokov.

Korekcia izobara prekrývanie, polyfunkčných presahmi a hluku z dopravy

Interference techniky ladenie detekovanej stanovením štandardnej sčítanie a meranie sériovo zriedené série vzoriek.

oprava isobaric Presahmi generované automaticky v súlade s softvérové ​​balíky nástrojov pre ICP-MS. Presné korekčné koeficienty stanovuje experimentálne.

oprava viacmocné presahmi vyžaduje pozornosť obsluhy na odstránenie rušenia. Zariadenie sa reakčná bunky sa odstránia väčšinu polyatomic prekrytie v zásade. Špecifické metódy rôzne prevedenia ručne odstrániť rušenie sú známe a sú uvedené v príslušných pokynov na existujúce zariadenia.

hluk z dopravy opravou maximálne možné riedenie a pozadia kyselinu normalizácie. Použitie vnútorného štandardu eliminuje chyby vzoriek riedenie a obsahujú veľa účinku matrice na plazmové a iónovej toku.

Kalibrácia nástroje, meranie, analýza merania a riadenia vnútornej operačné riadenie popísané v príslušných návode k prístroju. výrobcovia zariadení, aby vykonala zodpovedajúcu odbornú prípravu pre prevádzkovateľov v rámci zmlúv na dodávky zariadení.

metóda Formulácia stanovenie olova v krvi zriedením ICP-MS izotopu (Paschal et al., 1995)

Presne odvážený vzorka celej krvi dvoch 0,5 U jedného pridané približne 100 mg roztoku (približne 100 mikrolitrov) SRM 983 štandardu, ktorý obsahuje 92.15 at.% ²⁰⁶pb na konečnú koncentráciu približne 1 mg pb/ G. V dvoch podieloch sa pridá ku 2 ml koncentrovaného ultračistej HNO₃ a vypáliť v mikrovlnnej rúre v vážených PTFE plavidiel.

Zvyšky sa ochladí, prevedie sa do 15 ml skúmavky a zriedi sa vodou na 10 ml. Podiely sa analyzujú ICP-MS a stanovenie pomeru ²⁰⁸pb/²⁰⁶pb. sústredenie pb v pôvodnom vzorke sa vypočíta podľa vzorca:

kde [pb] - koncentrácia pb v neznámej vzorke v ng / g,

K - pomer relatívnej atómovej hmotnosti prírodného pb k relatívnej atómovej hmotnosti pb vo vzorke sa pridá ²⁰⁶pb (A_r = 206,063)

C_s - koncentrácia pb vo vzorke sa pridá ²⁰⁶pb v ng / g,

m_sp - hmotnosť (g) sa pridá roztok ²⁰⁶pb,

m_sm - hmotnosť (g) z pôvodnej vzorky,

0,0125 - relatívny obsah ²⁰⁸pb vo vzorke s pridaným SRM 983

0.921497 - relatívny obsah ²⁰⁶pb v rovnakom roztoku,

208/206 (y) - pomer v pridanom roztoku

₂₀₆ a a₂₀₈ - prirodzený obsah ²⁰⁶pb a ²⁰⁸pb v pôvodnom vzorky.

Spôsob viacprvková analýza krvných frakciách

pre plazma typicky v štandardnej konštrukcie plastové rúrky patriace do antikoagulačný (heparín-Na alebo -Li soľ, K₂-EDTA Trilon B = 9NC citranov, oxalát) Získajte vzorku krvi. Bunky by mali byť oddelené čo najskôr centrifugáciou, ako krátkodobého účinku heparínu a antikoagulačnej významne zmeniť základné zloženie séra. Pre dlhodobé skladovanie vzoriek krvi v chladničke je dôjsť neodvratný proces hemolýzy, a v mrazničke krviniek sú zničené.

pre sera aby vzorka krvi koagulovať ( "Curl"), po ktorej sa fibrínové zrazenina sa oddelí spolu s bunkami. Ak chcete získať bez proteínov filtrát (BBF), potom sa na 1 diel krvi pridá 9 dielov 5% TCA (TCA). Proteínová zrazenina sa odstráni odstredením (2 tis. Ot / min, 10 min). Pre určenie prvkov supernatantu bol použitý.

0,5 ml krvi alebo plazmy alebo séra sa umiestni sa pridá 4,5 ml 30% nádobke pre mikrovlnné ožarovanie HNO₃. obsah mineralizovaná (Napríklad v mikrovlnnej rúre firmy Berghof Speedwave ™ MWS-2 program P₆ 3 krokoch (25 minút)).

Mineralizovaná roztok sa zriedi 5% HNO₃ na objem 10 ml (riedenie 20-krát) a použitá pre stanovenie ICP-MS.

poznámka: V prípade výsledkov z rozsahu pre jednotlivé prvky analytu zriedené. Všetky riedenia do úvahy pri záverečných minútach výsledkov.

sulfo Stanovenie zlúčeniny (Prebsting a Gavrilova Timofeeva spôsob modifikácie pre stanovenie aktivity N-acetyltransferázu) (Pershin, 1971)

činidlá:

1) 15% kyseliny trichlóroctovej (TCA)

2) 0,5% roztok NaNO₂

3) nasýtený roztok CH₃Coon (1 diel soli sa rozpustí v 2,8 dielu H₂O)

4) 0,5% roztok acetylovaného H-kyseliny (1,8-aminooksinaftalin-3,6-disulfónová kyseliny) (pripravený v deň pokusu)

5), 7-10% roztok HCl

6) Hlavným štandardný roztok

10 mg sulfadimezin norsulfazola, umiestnené do odmernej banky s objemom 100 ml a 2,1 ml 0,1 N NaOH s cieľom úplného rozpustenia sulfanilamidom. doplňované destilovanou H₂O až k značke, to znamená pred koncentrácie liečiva 100 ug v 1 ml roztoku. Tento roztok sa skladuje v chladničke.

Kalibračná krivka bola skonštruovaná za použitia série riešenie študovať užívané lieky pre analýzu photoelectrocolorimeter (FEC) s modrým filtrom, napríklad 10-8-6-4-2 ug / ml.

Predmet je daná 1-2 tablety sulfo lieky, a zhromaždia sa denný moč. Trubica je naplnená bolo pridané 0,2 ml moču 2 ml roztoku №1 + 1 № 5 ml a 6,8 ml destilovanej H₂O. Po miešaní a filtrácii 1 ml filtrátu zodpovedá 0,02 ml moču.

Analýza voľného sulfanilamidom. V skúmavke sa naleje 2,5 ml filtrátu moču sa naleje 0,1 ml roztoku № 2, zmes sa mieša a po 10 minútach sa vleje 1,5 ml roztoku № 3 a znova premieša. Ihneď, 0,25 ml roztoku № 4. Potom, čo sa objaví premiešanie ružové zafarbenie. Po 15 minútach sa intenzita sa meria na FEC s modrým filtrom.

Pracovné štandardy spracované Tate rovnaký. Kalibračnej krivky sa vypočíta koncentrácia voľného liečiva s prihliadnutím na všetky riedenia.

Analýza celkovej sulfanilamidom. Po obdržaní tejto drogy v tele subjektu acetylovaného N-acetyltransferázu. Táto časť môže byť určená iba po hydrolýze. V skúmavke sa naleje 2,5 ml vzorky a 0,25 ml № 5. Podobne tiež pracovať so štandardnými roztokmi. Rúrka sa zmesou sa umiestni do vriacej vody po dobu 30 minút. Po ochladení sa objem kvapaliny v trubici sa upraví na 2,5 ml destilovanej H₂O. Ďalšie práce s riešením podľa spôsobu stanovenia voľného sulfanilamidom.

Kalibračná krivka konštruovaná s štandardného pracovného roztoku po hydrolýze sa vypočíta celkové množstvo lieku (voľný a acetylovaný) vo vzorke. Po odpočítaním množstva voľného liečiva získanej v množstve acetylovaného prípravy %%, vztiahnuté na celkovú.

Medical bioneorganika. GK ovce