Metódy na mikroskopické vyšetrenie mikroorganizmov

Video: Microbiology. Príprava pevné prípravky (E. Zvonaryova)

Najmenšie veľkosť mikroorganizmy sú zodpovedné za použitia baktérií na štúdium morfológie presných optických prístrojov - mikroskopov. Najčastejšie sa používa svetlé pole mikroskopia, tmavé pole mikroskopia, fázový kontrast a fluorescenčné mikroskopie. Pre špeciálne mikrobiologických štúdií využívajúcich elektrónovej mikroskopie.

svetlé pole mikroskopia

Jasné pole mikroskopia sa vykonáva s použitím bežného svetelného mikroskopu, hlavná časť, ktorá je šošovka. Na okraji šošovky označený zväčšenie: 8, 10, 20, 40, 90.

V štúdii mikróbov používaných ponorenia systém (šošovky). Ponorenie šošovka ponorí do poklesu cédrového oleja, aplikovanej na liečivo. Cédrový olej má rovnaký index lomu ako sklo, a to je dosiahnuté najmenší rozptyl svetelných lúčov (obr. 1.12).

Obr. 1.12. lúče predmetu v ponorné šošovky

Obraz získaný šošovkou zvyšuje okulár, pozostávajúce z dvoch šošoviek. V domácich mikroskopov okuláre sú používané s rastúcou 7, 10, 15 (obr. 1.13). Celkové zväčšenie mikroskopu je daná súčinom šošovky pre zvýšenie zväčšenie okuláru. V mikrobiológiu sa zvyčajne používa na zvýšenie na 900-1000 časy. Kvalita mikroskopu nie je závislá na miere rastu, ale na jeho rozlíšenie.

Obr. 1.13. Schéma komplexného svetelného mikroskopu pre pozorovanie v jasnom poli, upravená pre osvetlenie Koehler

Tým musíme pochopiť, najkratšia vzdialenosť medzi dvoma bodmi je prípravok, v ktorom sú jasne rozoznateľné pod mikroskopom. Rozlíšenie bežných svetelných mikroskopov s ponorným systému je 0,2 um.

mikroskopia v tmavom poli

Mikroskopia v tmavom poli pohľade je založený na nasledujúcom princípe (obr. 1.14). Lúče osvetľujú objekt nie je dno a bočné a nespadajú do oka pozorovateľa: zorné pole zostáva tmavé a objekt je osvetlený na jej pozadí. To sa dosiahne špeciálnym chladiči (paraboloidu) alebo konvenčné chladičom, na ktoré sa vzťahuje na stredu kruhu čierneho papiera.

Obr. 1.14. Vodičské mikroskop pre pozorovanie v tmavom poli.

Prípravy na mikroskopia v tmavom poli sa pripravuje na typu "visí" a "rozdrvil" drop. Pri príprave liečivá "drvený" pokles skúšobný materiál (bakteriálne kultúry vo fyziologickom roztoku), sa nanesie na podložné sklíčko, ktorý je potiahnutý krycím sklom. Drop materiál vypĺňa celý priestor medzi krytom a šupátka na vytvorenie rovnomernej vrstvy. Na prípravu "visí" kvapky nutné použiť špeciálne sklíčka s vybraním v stredu a krycích skiel.

V stredu krycie sklíčko potiahnuté testovaného materiálu. Okraje drážok na podložné sklíčko postriekané vazelínou, a že sa vzťahuje na krycie sklo tak, aby bol pokles oproti prehĺbenie centrum. Potom obráteného prípravu sklíčkom nahor. Darkfield mikroskopiu sa používa na štúdium živých organizmov bez náteru.

Fázovo kontrastné mikroskopie

Pri prechode svetelného lúča cez achromatický objektu menia iba výkyvy fázové svetelné vlny, ktorý nie je vnímaný ľudským okom. Kým sa obraz je kontrast, je nutné transformovať fázovou zmenou v oblasti viditeľného svetla amplitúda vĺn. Toto je dosiahnuté s fázovým kontrastom kondenzátorové šošovky a fázy (obr. 1.15).

Obr. 1.15. Schéma mikroskopu s fázovým kontrastom.

Fázového kontrastu kondenzátor je konvenčná šošovka s revolverom a sada prstencových membrán pre každú šošovku. Fáza šošovka má fázy, doska, ktorá sa získa použitím vzácnych zemín soli na objektíve. Obrázok prstencová clona krúžok sa zhoduje s fázou zodpovedajúce objektívne dosky.

Mikroskopia s kontrastnými fázami značne zvyšuje kontrast v objekte, a používa sa pre štúdium natívnych preparátov.

fluorescenčné mikroskopia

Fluorescenčné mikroskopia je založená na schopnosti niektorých látok pod vplyvom dopadajúceho svetla ožarovaním zväzkom na druhej strane (zvyčajne väčšie) vlnovou dĺžkou (fluoreskujú). Tieto látky sa nazývajú fluorochrómy (akridín žltá, rhodamin, atď.). Objekt ošetrené fluorochrómy ultrafialovým svetlom dostane svetlú farbu na tmavom zornom poli.

Hlavná časť fluorescenčného mikroskopu je iluminátor s lampu a ultrafialové farby filtračného systému k nej (obr. 1.16). Je dôležité použiť nefluorescenční imerzný olej.
Fluorescenčné mikroskopia sa používa v praktických mikrobiológiu pre indikáciu a identifikácia infekčných agens.

Obr. 1.16. Schematické znázornenie fluorescenčného mikroskopu 1-2 oblúk lampa- - Quartz kolektorov 3 - kyveta naplnená roztokom medi- síranu 4 - čelné kollektora- 5 - UV filter na 6 - 7 prizma- - doska urán stekla- 8 - očný filtra pútavý
ultrafialové lúče.

elektrónová mikroskopia

Funkcia optickej mikroskopy obmedzená príliš veľkú vlnovou dĺžkou viditeľného svetla (6000 A). Objekty, ktoré sú menšie ako táto hodnota sú mimo riešenie svetelného mikroskopu. V elektrónovom mikroskope, namiesto svetelných vĺn pomocou elektrónových lúčov, ktoré majú extrémne krátku vlnovú dĺžku a vysoké rozlíšenie (obr. 1.17).

Obr. 1.17. Schéma transmisný elektrónový mikroskop.

Ako zdroj elektrónového zväzku elektrónové trysky používané, je bázou volfrámový drôt zahrievaný elektrickým prúdom. Medzi wolframom a anódou v dráhe elektrónov je elektrické pole s vysokým napätím. Elektrónový lúč spôsobuje žiaru obrazovky fosforeskujúce. Prechádzajúce objektu, ktorého časti majú rôznu hrúbku, elektróny sa k oneskoreniu, ktoré sa prejavia na sitových častí stmavnutie. Objekt získava kontrast.

Formulácia pripravené pre elektrónovú mikroskopiu v najlepších koloidných vrstiev bola skúmaná po sušení predmetov ( "natívne lieky"), rozprašovaním pomocou ťažkých kovov, ultratenké časti spôsobu replík a ďalšie.

Elektrónová mikroskopia môže objaviť najmenšie štruktúry za účelom dosiahnutia zvýšenia až do výšky 200 000, alebo pozri veľkosť objekty 0,002 mikrónov.

LV Timoshenko, MV Chubik

Delež v družabnih omrežjih:

Podobno