Lymfokínov aktivované zabíjačské bunky pre imunizáciu. Vplyv lymfokíny aktivovaných NK buniek v prirodzenej imunity

IL-2 alebo exogénne analógy stimulovať proliferáciu NK buniek a zvýšiť ich cytolytickú funkciu, čo vedie k tvorbe tzv lymfokíny aktivovanú zabíječskou (LAK). Zo svojej podstaty, LAC sú cytotoxické lymfocyty, ktoré sú schopné ničiť bunky infikované vírusmi alebo intracelulárnymi baktériami a nádorových buniek. V súčasnej dobe je možnosť liečby LAK študoval v rôznych formách rakoviny. Infekčných chorôb adoptívny transfer metóda LAC prakticky študované.
toto otázkou My sme študovali na infekcie myší K. pneumoniae K2 CBA kultúry kmeňa.

Lymfokíny aktivovanú zabíječskou ML pripravené zo sleziny myší, keď sú kultivované po dobu dvoch dní v médiu RPMI-1640 obsahujúceho 1000 IU / ml IL-2, boli bunky premyté a použité v experimente.
štúdie Morfogistohimicheskie Tie ukázali, že LAK bunky predstavujú veľký počet lymfoidných a typ immunoblast prolymphocytes s bazofilné cytoplazmy. Tieto škvrny sa často nachádzajú v bunkovom delení mitotický stav. Vo fáze kontrastné mikroskopia LAK bunky predstavujú proliferujúce konglomeráty.

Tak, keď Účinky IL-2 v MT sleziny myší došlo LAK generácie, vyznačujúci sa tým, množenia a aktivácia lymfoidných buniek. Zvýšená expresia aktivačných antigénov-onnyh tvoriacich znaky imunofenotypoch LAC tiež svedčil aktivácie lymfocytov procesy. Okrem toho sme zistili, že LAK mali signifikantne vyššia vrah aktivitu v porovnaní s neporušenou ML vo vzťahu k NK bunková línia citlivá na myšiach lymfómu YAC-1.

Podľa všeobecného presvedčenia, NK - hlavná subpopulácii lymfocytov exprimujúcich r75r receptora reťazca IL-2 a selektívne aktivované a proliferujúce pod jeho vplyvom na tvoriť LAC schopný efektívne lyžujú cieľových nádorových buniek. Avšak, spolu s vyššie uvedenými myšlienkami, existuje dôkaz o existencii populácie v LAK NKT-buniek, ktoré exprimujú nielen NK (CD16, CD56) markerov, ale aj diferenciáciu T-bunkových antigénov (CD3, CD4, CD8).

tieto údaje vyhovieť predchádzajúci návrh NK-bunky, ktoré sú považované nielen ako samostatný subpopulácii, ale aj ako stupeň diferenciácie zrelých lymfocytov. Zo zrelých lymfocytov inkubáciou s IL-2, môžu byť pripravené tzv NK-buniek LAK.

v našom ML experimenty po kultivácii sleziny s IL-2 boli získané LAC expresiu na ich aktivačný membrána molekuly (CD25), a molekuly hlavného histo-kompatibility komplex MHC I, MHC II. V rovnakej dobe, v populácii LAK okrem NK, prítomných exprimujúcich buniek a diferenciáciu T-bunkových antigénov (CD3, CD4, CD8).

Najnovšie v rovnakých množstvách boli detekované v počiatočnej populácii ML. použitá technológia získanie lymfokíny aktivovanú zabíječskou To poskytuje významné zvýšenie NK-buniek, s 1,5 až 20,3%, a bunky obsahujúce markerové molekuly CD25 a prezentáciu antigénnych MHC I a II.

výsledný Suspenzia lymfokíny aktivované TERIÉR bola myšiam intraperitoneálne v 2,5 x 106 buniek v 0,5 ml 0,9% roztoku chloridu sodného. Potom, intraperitoneálne podali 250 buniek v objeme 0,5 ml K pneumoniae K2. Ako kontroly boli použité ML kultivované v prítomnosti PHA (10 ug / ml).

Lymfokíny aktivovanú zabíječskou infikovaných K. pneumoniae (100 LD50) myš poskytuje 100% prežitie zvierat v podstate simultánne podaní intraperitoneálnej mikrobiálnych buniek a vrah. ML, PHA-aktivované, chránená v 50% pri 100% usmrtení intaktných myší, ktoré dostali infikovanie rovnakú dávku.
náš výskum potvrdiť Štúdia uskutočniteľnosti na využitie LAC pre adoptívnu imunoterapiu, ako je zavedený do myší intraperitoneálne LAC K. pneumoniae K2 bráni rozvoju ochorenia u zvierat.

pri určovaní cytokín v živnej pôde boli zistené LAC zvýšený obsah IL-1 po 24 hodinách a 72 hodinách inkubácie (254 + 12,3 pg / ml a 213 ± 11,5 pg / ml, v danom poradí), po 72 hodinách - IL-6 (224 ± 21 2 pg / ml) a IL-10 (150 ± 10,5 pg / ml) v porovnaní s kultúrou ml (obsah týchto cytokínov v kontrolách nepresiahla 25 až 80 pg / ml) sa inkubuje bez IL-2. Je zaujímavé, že v živnej pôde LAC nezvýšil obsah regulačného IL-12, ktorý sme v značných množstvách, ktoré sú v kultivačnom médiu DK.

cytotoxická Aktivita lymfokíny aktivovanú zabíječskou, odvodený zo sleziny myší (CBA) bola stanovená na NK-citlivé YAC-1 myší lymfóm bunkovej línie v obnovenie test 3- (4,5-di-methylthiazol-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromid (MTT-test). Nádorové bunky (1 x 104 v 1 ml) boli inkubované v médiu s LAK v rôznych pomeroch a pomocou absorbancie pri 540 nm bolo vypočítané percento lýzu nádorových buniek (percento cytotoxicity).
Kvalifikácia vrah aktivitu efektorových buniek, ukázala, že LAC majú významne vyššiu NK-aktivitu, v porovnaní s neporušenou myšou ML.

V pomere 1: 5 a LAK nádorové bunky Myšou lymfóm YAC-1 Cytotoxická aktivita NK buniek sa zvýšil 6-krát v porovnaní s ML. Za týchto podmienok 15,5% ML lyžovanie bunkové línie K562, zatiaľ čo za rovnakých podmienok LAC spôsobil 92,2% smrť nádorových buniek (p < 0,01). В меньших соотношениях мишени/эффекторы (1:2 и 1:1) эти различия не столь значимы, хотя цитотоксическая активность ЛАК превышает таковую у МЛ интактных мышей.