Fyziológia mikroorganizmov: vlastnosti kultúry baktérií, izolácia čistých kultúr mikroorganizmov

Kultúrne vlastnosti baktérií

Do kultúry (alebo macromorphological) vlastnosti zahŕňajú vlastnosti mikrobiálneho rastu na pevných a kvapalných živnom médiu. Na povrchu pevných živných médií, v závislosti na plodine, mikroorganizmy môžu rásť ako kolónie, mŕtvica alebo kontinuálne trávnika.

Kolónie nazýva izolovaný zhluk buniek jedného druhu, ktoré sa pestujú z jedinej bunky (klon). V závislosti na tom, kde rastie, že mikroorganizmus (na povrchu pevných živnom médiu alebo v jeho silnejší) rozlišujú povrchu, hĺbkou a spodné kolónie.

Kolónie pestované na povrch média, sú rôzne: sú druhovo špecifické, a ich štúdium sa používa na určenie špecifickej príslušenstvo kultúru v skúmaní.

Pri popise kolónie vziať do úvahy tieto prvky:
1) tvar Colony - bicykel, améboidním, rizoidnaya, nesprávne, atď.;.

2) veľkosť (priemer), kolónie - veľmi malé (bod) (0,1 do 0,5 mm), malý (0,5 do 3 mm), strednej veľkosti (3-5 mm) a veľké (viac ako 5 mm v priemere );

3) Colony povrch - je hladký, hrubý, zložený, vráskavá, sa sústrednými kruhmi alebo radiálne pruhovaná;

4) Kolónie profil - ploché, konvexné, kužeľovitý, crateriform atď.;.

5) transparentnosť - matný, matný, lesklý, transparentné, prachový;

6) Farba kolónií (pigment) - bezfarebný alebo pigmentované (biela, žltá, zlatá, červená, čierna), zdôrazňujú výber pigmentu v médiu s jeho sfarbenie;

7) Kolónie hrana - hladký, vlnitý, zúbkovaný, lemované, atď.;.

8) Štruktúra kolónie - homogénna, jemného alebo hrubozrnný, struychataya- okraj a štruktúra kolónie sa stanoví za použitia lupy alebo mikroskopom pri malom zväčšení jeho umiestnením na Petriho misku s siatie na mikroskopu fázu nadol vekom;

9) stanovenie konzistencie kolonii- dotykom slučky: kolónie môžu byť hustá, mäkká, Vrastajúce do agaru, mukosální (pre slučkových úsekov), krehké (ľahko zlomený pri kontakte s slučky).

Hlboké kolónie často pripomínajú viacmenej zlúčené lenticely (forma v úpletu so špicatými konci), niekedy kúsky vlny s threadlike prídavky do kultivačného média. Tvorba hlbokých kolónií často sprevádzané ruptúrou hustom médiu, ak mikroorganizmy izolované plyn.

Spodná kolónie majú zvyčajne podobu tenké priehľadné fólie, plazivý pozdĺž spodnej časti.

Funkcia kolónie sa môže meniť s vekom, ktoré sú závislé na zloženie média a teploty kultúry.

Rast mikroorganizmov v kvapalných médiách do úvahy, pomocou štyroch-sedemdňovej kultúry pestované v stacionárnych podmienkach.

V tekutom médiu počas rastu mikroorganizmov je pozorovaný zákal médiá, tvorbu filmu alebo zvyšok.

Keď sa pestuje na polo (0,5-0,7% agare) Médium mobilné mikróby spôsobí výrazný zákal, stále tvorí len rast v priebehu stávkovanie pichnutie v stredu.

Často sa mikrobiálnej rast je sprevádzaný zápach pigmentácia strednej uhličitého. Charakteristický zápach niektorých kultúr baktérií spojené s tvorbou rôznych esterov (uksusnoetilovogo, uksusnoamilovogo a kol.), Indol, merkaptán, sírovodíka, skatol, amoniak, kyselina maslová.

Schopnosť tvoriť pigmenty je vlastné mnohých typov mikroorganizmov. Chemická povaha pigmentov rôznych: karotenoidy, antokyány, melanínu. Ak je pigment je nerozpustná vo vode, farebné kultúra nalet- iba v prípade, že je rozpustný, zafarbený a živné médium. Má sa za to, že pigmenty chráni baktérie pred ničivým pôsobením slnečného žiarenia, takže vzduch, ako veľa pigmentované baktérie, okrem toho, pigmenty sa podieľajú na metabolizme týchto mikroorganizmov.

V prírode existujú tzv fosforeskujúce baktérie kultúr, ktoré svietia v tme zelenkavo modrasté alebo žltkasté svetlo. Tieto baktérie sa vyskytujú predovšetkým v rieke alebo pri mori. Pre luminiscenčných baktérií - photobacteria -otnosyatsya aeróbnych baktérií (Vibrio, koky, tyče).

Izolácia čistých kultúr mikroorganizmov

Čistá kultúra sa nazýva kultúru, ktorá obsahuje mikroorganizmus druhu. Izolácia čistých kultúr baktérií -Required krok bakteriologického výskumu v laboratóriu, študovať rôzne mikrobiálnu kontamináciu životného prostredia, a všeobecne pre akékoľvek prácu s mikroorganizmami.

Skúšobný materiál (voda, pôda, vzduch, potraviny alebo iné objekty) zvyčajne obsahuje zárodky asociáciu.

Izolácia čistej kultúry nám umožňuje študovať morfologické, kultúrne, biochemické, antigénne a ďalšie funkcie, v závislosti na súhrne, ktorý je určený na druhy a typy členstva patogénu, napr. E. vytiahol identifikácii.

Pre izoláciu čistých kultúr mikroorganizmov sa používajú techniky, ktoré môžu byť rozdelené do niekoľkých skupín:
1. Spôsob Pasteur - sériové riedenie testovanej látky v tekutom médiu na koncentráciu jednej bunky, v množstve (historický význam).

2. Spôsob podľa Koch ( "zapojenie doska") - sériové riedenie testovaného materiálu v roztavenom agare (teplota 48 až 50 ° C), a potom naplnením do Petriho misky, kde agar stuhne. Siatie značky, spravidla tri alebo štyri posledného riedenie, kedy baktérie ubúda v budúcnosti, s rastom Petriho misiek objavia izolované kolónie sú vytvorené z jedného z pôvodnej materskej bunky. Z izolovaných kolónií v hĺbke agare sú čisté kultúry baktérií na čerstvé reseeding prostredie.

3. Spôsob Shukevich - používa sa pre získanie čistej kultúry Proteus a ďalšie mikroorganizmy, ktoré majú "plazivej" rastu. Siatie skúšobný materiál pre vytvorenie kondenzovanej vody na spodnej strane sklonu. Pohyblivé baktérie (Proteus), sú schopní chodiť do šikmej kultúry, stále zostávajú formy rastú na dne, v mieste očkovania. Subkultivace horné okraje kultúry, je možné, aby sa získala čistá kultúra.

4. Spôsob Drigalski - široko používané v bakteriologické praxi, testovaný materiál zriedený v skúmavke so sterilným fyziologickým roztokom alebo vývaru. Jedna kvapka z prvého materiálu sa privádza do šálky s sterilnej sklenenou špachtľou a rozšíri po celom povrchu média. Potom sa rovnako špachtľa (nehorí cez ňu do plameňa horáka), aby sa rovnakou plodinu v druhej a tretej dosky.

S každou inokulácie baktérií na stierky je stále menej a menej, a nanesené na tretiu pohár, budú baktérie sa rozdelí po povrchu kultivačného média oddelene od seba navzájom. Po 1-7 dní v inkubátore udržiavanie šálky (v závislosti na rýchlosti rastu mikroorganizmov) v treťom šálke dáva každej baktérie bunkového klonu izolované kolónie tvoriace ktorý ďalej pestované v šikmom agare, aby sa hromadiť čistá kultúra.

5. Spôsob Weinberg. Zvláštne problémy vznikajú pri prideľovaní čistých kultúr obligátne anaeróbnych mikroorganizmov. V prípade styku s molekulárnym kyslíkom nespôsobí okamžitú smrť buniek, plodinu produkovanú metódou Drygalski, ale potom sa okamžite umiestni do šálky anaeróbne. Avšak, väčšina z nich je spôsob chovu. Jeho podstata spočíva v tom, že riedenie materiálu sa vykonáva v roztavený a ochladený na teplotu 45-50 ° testovacieho média.

Skontrolujte, sériová riedenie 6-10, potom sa médium v skúmavkách sa rýchlo ochladí a vyleje sa povrchové vrstvy zmesi parafínu a vazelínového oleja, aby sa zabránilo vnikaniu vzduchu do vnútra živnej pôdy. Niekedy sa kultivačné médium po naočkovaní a v miešaní sa prenesie do sterilnej skúmavky alebo kapilárnej Burri Pasteurove pipety, ktorej konce sú uzavreté. Ak budú úspešní chov v rúrkach, rúrky Burri, Pasteurove pipety anaeróbne rast izolovaných kolónií. Použiť kultivačné médium, objasnil, že izolované kolónie boli jasne viditeľné.

Pre extrakciu Izolované kolónie anaeróbnych trubice zahriate mierne ho otáča v plameni, agarom, priliehajúce k stenám, a obsah skúmavky sa taví agar stĺpec vkĺzne do sterilnej Petriho misky. Stĺpec agaru rez sterilný pinzetou a vyberte kolónie slučku. Extrahované kolónie boli umiestnené do kvapalného média, priaznivého pre rozvoj mikroorganizmov pridelené. Testovacie médium fúkané z trubice Burri, vedenie plynu cez vrstvu vaty.

6. Spôsob podľa Hungate. Keď sa chcú dostať izolované kolónie baktérií, obzvlášť vysokou citlivosťou na kyslík (prísne aeróbnych) s použitím spôsobu rotujúcich Hungate rúrok. Do tohto roztaveného agaru naočkovanom baktérií pri konštantnom prúde skrz trubicu inertného plynu sa zbaví kyslíka nečistoty. Trubica sa potom uzavrie gumovým uzáverom a vodorovne do svorky, rotačné probirku- stredu rovnomerne rozdelené pozdĺž stien rúrky a tenkých vrstiev stuhne. Použitie tenkej vrstvy trubice naplnené zmesou plynov umožňuje získanie izolovaných kolónií jasne viditeľné voľným okom.

7. Izolácia jednotlivých buniek pomocou mikromanipulátor. Mikromanipulátor - zariadenie, ktoré umožňuje mikropipety alebo osobitné mikropetli odstránenie jednej bunky zo suspenzie. Táto operácia je kontrolovaný pod mikroskopom. Na fáze vlhkej komore mikroskopom určiť, v ktorom liečivo je umiestnený "visiace kvapky". Držitelia prevádzkové statívy pevnej mikropipetou (mikropetli), ktorého pohyb je v zornom poli mikroskopu vyrobené s mikrónov presnosť vďaka systému skrutiek a pák. Výskumník pohľade do mikroskopu jednotlivé bunky mikropipety načíta a prenáša ich do skúmaviek, obsahujúcich sterilné kvapalné médium, čím sa získa klon buniek.

LV Timoshenko, MV Chubik

Delež v družabnih omrežjih:

Podobno