Test trombínu generácie

Táto metodika bola navrhnutá britskí vedci v roku 1953, aby posúdila stav systému hemostázy u hemofílie. Je potrebné poznamenať, že navrhovaná metóda v origináli bolo veľmi ďaleko k dokonalosti, takže po dlhú dobu, že nie je daná vážnu pozornosť. Druhý spôsob pôrodu prežil vďaka Hernker Conrada, ktorý urobil množstvo vylepšení v rámci postupu analýzy v 90. rokoch minulého storočia. Najdôležitejšia zmena Hernker K. a kol. bolo použitie flyuoro- a chromogénne substráty pre detekciu tvorby trombínu, čím sa výrazne zvýšila reprodukovateľnosť spôsobu. V tomto prevedení, je spôsob podľa trombínu vznikajúceho v priebehu reakcie ničí peptidový substrát, ktorý spôsobuje uvoľnenie fluorofor molekuly. Zmena intenzity emisie je detekovaná fluorometri v pravidelných intervaloch.

princípom metódy

Test je založený na udržiavanie rýchlosti hydrolýzy peptidové väzby fluorogenního substrátu špecifického pre trombín. Stanovenie substrátu výskytu zlomenín fluorometri sa vykonáva v jamkách 96-jamkové doštičky, v ktorom bola zmes inkubovaná PRP vzorky s koagulačné aktivátora. Ako použitie aktivátora rekombinantného tkanivového faktora činidlo a chlorid vápenatý a štandardizovať a zlepšiť rýchlosť koagulácie v testovacom systéme sa pridajú fosfolipidy. Štúdium kinetiky tvorby trombínu nám umožňuje odhadnúť rovnováhu prokoagulačnej a antikoagulačný mechanizmy.

Reagenty a zariadenia

• Rekombinantný faktor ľudských tkanív (1 pmol).
• Špecifické trombínu fluorogenické substrát.
• Pufer roztok obsahujúci chlorid vápenatý.
• Kalibrátor s aktivitou ľudského trombínu 580 nmol.
• Fluorometri.

Krvné vzorky pre výskum

Ako ukážkový záznamové thromboelastogram používať BTP. Rad štúdií k účtu pre prispenie doštičiek v tvorby trombínu je vhodné použiť plazmy bohatej na krvné doštičky. Tento test je vysoko citlivý na chyby a má vopred analytické fáze štúdie.

Video: prednáška 29 - Skúšobné metódy generácie

výkon technika

zisťovania sa vykonáva v súlade s návodom na použitom zariadení a algoritmu počítačový program, ktorý vypočíta dynamiku hlavných ukazovateľov tvorby trombínu.

Vyhodnotenie výsledkov štúdie

Fluorogenické substrát špecifický pre trombín, takže zmena intenzity luminiscencie po pridaní aktivátora koagulácie úmernou rýchlosti tvorby tohto kľúčového koagulačné enzým.

Po kalibrácii štandardného množstva trombínu fluorometri umožňuje skonštruovať krivky vzniku trombínu. Štúdia hodnotila oneskorenie tvorby trombínu (lag time), maximálne množstvo trombínu (Peak trombínu), čas do dosiahnutia maximálnej trombínu (ttPeak), rovnako ako endogénne trombínový potenciál (ETP).

Interpretácia výsledkov prieskumu

Vzhľadom k tomu, koagulačný faktor je kľúčový enzým v koagulačnej hemostázy, trombín skúška generácia je cenným ukazovateľom integrálne zrážanie krvi.

Výsledky skúšok sú závislé na spôsobe aktivácie koncentrácie aktivátora koagulácie, a mnoho ďalších faktorov, takže sa meniace podmienky technika umožňuje prispôsobiť ju detekovať rôzne vady hemostatického systému. To znamená, že prídavok thrombomodulinu v testovacom systéme, pomáha identifikovať hyperkoagulovatelné posuny v pozadí leydenovskoy mutáciami. Štúdium vzniku trombínu v plazme bohatej na doštičky umožňuje detekovať dysfunkcii doštičiek hemostázu Glantsmana trombastenií, Bernard-Soulier syndróm a ďalšie.

Najčastejšie používaným aktivácia koagulácie BTP tkanivového faktora, ktorý umožňuje vyhodnotenie stavu koagulácie. Tento výkon u pacientov s časom hemofíliu a ďalšie koagulopatia opatrenia Lag predĺži, a ETP a Peak trombínu znížená. Intenzita týchto zmien v týchto pacientov závisí na aktivite koagulačných faktorov VIII a IX.

príčiny chýb

Chyby Preanalytická fáza štúdie, vo Vol. H. zlom dávkovanie citrátu na odber žilovej krvi.

• Chyby odstreďovanie pri získaní PRP vzoriek.
• Kontakt s heparínom študovali krv z žilového katétra.
• Hemolýza.

Ďalší analytické techniky

V súčasnej dobe vyvinuli ďalšie analytické techniky, ktoré sú schopné vizualizáciu koagulačné proces, ako je napríklad metóda záznamu rastu priestorové zrazeniny a Tromboelastografie. Všetky tieto techniky vizualizovať zrážania krvi a je schopný vypočítať integrálne koagulačných parametrov, ale ich diagnostická špecificita je stále nízka.