Rozvoj a využívanie metód pre určenie sérotypu cirkulujúci genotypov vírusu hepatitídy C.

Vírus hepatitídy C (TOS) sa týka vozbuditelyams mimoriadne výrazné heterogénnosť populácie. Bolo zistené, že pacienti s chronickou HS spojené s rôznymi genotipamivirusa, inak reagovať na vírus interferonoterapiyu.Opredeleniegenotipov HS dôležitý v epidemiologických štúdiách, pretože umožňuje prenos dobre zdokumentované patogénu.

Účelom tejto štúdie - zhodnotiť vozmozhnostimetoda sérotypizácia určiť genotypy HS. Dlyaserotipirovaniya bol prevzatý z pôvodnej metódy, opisannyygruppoy vedcov z Veľkej Británie pod vedením P.Simmonds (1993,1995). 12 krátke peptidy (18-19 aminokyselín) reprezentujúci epitopy proteínu NS4 6 genotypy farme boli poluchenymetodom syntéza v pevnej fáze, čistenie chromatografiou a vysokoeffektivnoyzhidkostnoy použitý ako základ pre imunologické immunosorbentadlya s sera soderzhaschimiantitela na NS4 proteínu (anti-NS4) , Prítomnosť anti-NS4 podtverzhdalosv ELISA sa zmesou peptidov pre sérotypových alebo imunoblotu (LiaTek HCV, Organon Teknika- Wellcozyme HCV Western blot, Murex).

Určujúcou špecificitu genotypy ťažký razarabotannymvariantom sérotypizácia študoval porovnaním výsledkov "slepom" testovací panel 154 sera anti-NS4-pozitivnyhobraztsov sa známymi genotypmi (s výnimkou 1 vzorky) je definovaná použitím postupu opísaného RFLP P.Pohjanpeltoet al. (1996) na Ústave virológia, University of Helsinki.

Pre štúdium šírenie variantovvirusa GS v niektorých oblastiach Ruska (Petrohrad, Nižnij Novgorod, Ufa, Belgorod) a susedných krajín (Bielorusko, Kazachstan, Gruzínsko) sérotypom boli testované anti-NS4-pozitivnyesyvorotki dostal od 474 ľudí, vrátane 157 darcov krvi 237 pacientov s hepatitídou C, a 80 ohrozených osôb (vnutrivennyenarkomany, pacientov s rakovinou, pacienti hronicheskogogemodializa centier, nemocníc a iných tuberkulózu.).

Výsledky "slepých" skúšobných 154 syvorotoks známymi genotypmi vírusu hepatitídy C RFLP prezentované tabuľky №1. Všeobecne serotipirovano 148 vzoriek (96,1%). Polnoesovpadenie síru a genotypy pozorovaná 130. 148 sér (87,8%). Pri jednotlivých genotypov to bolo razlichnym.Naibolshaya výsledky frekvencie zodpovedajúce pozorované HCV-1 - (92,5%) s indexom rozptylu 87,1% pre sera subtipa1v na 100% sére zmiešané podtypy 1a + 1v- pre vyvolaná HCV 3- 94,3% (všetko v sére liečených subtyp 3a). Najmenší výsledky protsentsovpadeniya pozorované pri testovaní séra na RFLP patrí do HCV genotypom 2 (80%). Pri 5 serotipirovaniibylo zistilo sér, ktoré možno pripísať genotipuHCV-4. Avšak, pri porovnaní výsledkov s RFLP dát sovpadenieotmecheno iba 2 vzoriek (40%).

Výsledky detekcia vysoká korelácia genotipovvirusa GS získal dve úplne odlišné metódy pre štúdium pozvolilaispolzovat sérotyp cirkulujúcej GS variantovvirusa v jednotlivých teritóriách. Výsledky tejto časti issledovaniysummirovany v tabuľke №2. Všeobecne platí, že všetky študoval territoriyahvyyavlena obehu 3 genotypov HS v jednom sluchayahv štyri regióny sú definované HCV-4 genotyp. Najčastejšie opredelyalsyagenotip HCV-1 (zo 47,1% v sére z Gruzínska do 74,4% - z Bielorusko) .Vtoroe miesto rebríčku na objasnenosť všetkých území obsadený prakticheskina HCV genotyp 3 (15,5% v sére Belorussiido 34,0% - od Nižnij Novgorod). Oveľa menej študoval syvorotkisoderzhali typu špecifických anti-NS4 HCV-2. Maximálna chastotavyyavleniya tento genotyp bol nainštalovaný v sére Bieloruska (12,7%), Kazachstane (13,7%), a minimálne - v sére z Petrohradu (3,8%). V 35 sér všetkých študovaných regiónoch s sérotypov sa stanovila prítomnosť anti-NS4 rôznych genotypov (genotypov zmiešané). Najväčšia časť sér zo vzoriek smeshannymigenotipami vyrobených, v ktorých ako opredelyalisHCV-1 a HCV-3 (26 35-74,3%), teda najčastejšie vstrechayuschiesyagenotipy. Iné varianty kombinácia s znachitelnorezhe - HCV-1 + HCV-2 (8,6%), HCV-2 + HCV-3 (11,4%). HCV-1 + HCV-4 v kombinácii odhalila dve séra z Georgie (5,7%).

Materiály tejto štúdie svidetelstvuyuto, že použitie syntetických peptidov, sootvetstvuyuschihantigennym determinanty neštrukturálne proteín NS4, v kachestveosnovnogo zložky ImmunoSorbent ELISA umožňuje uspeshnoopredelyat genotypov vírusu v sére infikovaných poľnohospodárskych etimvozbuditelem ľudí a sledovať obeh genovariantovvozbuditelya regióny.

Pre stanovenie genotypu ako ťažký ispolzovanmetod PCR-RFLP s typovo špecifické reštrikčné fermentamiBst U1 a BST N1 a následnou analýzou reštrikčných výrobkov s pomocou horizontálne elektroforézou na 3% agarózovom géli (ThiersV. Et al., 1997). Táto metóda bola testovaná séra pacientov s chronickou krovi15 GS dostávajú interferón. RNKvirusa GS detekovaný v 14 vzoriek, pričom v 6 prípadoch (42,9%) namontovaný subgenotip 3a, 3 (21,4%) - 1 gentip (2- subgenotip1v 1 - subgenotip 1a). GS RNA vírus, izolovaný od 4 do obraztsovotnosilas zriedka detekovateľné patogén genotypov - 4/5. Poslednienahodki vyžadujú ďalšie skúmanie.

Tabuľka 1. SOPOSTAVLENIE PEZULTATOV OPPEDELENIYAGENOTIPOV VIPUSA GEPATITA S METÓDAMI RFLP a SEPOTIPIPOVANIYA

PPIMECHANIE: * - nie tipipovalos ** - abs.chislo / percentuálny podiel;

Tabuľka 2. CHASTOTA DETEKCIA PAZLICHNYH GENOTIPOVVIPUSA GEPATITA metódami SEPOTIPIPOVANIYA HA OTDELNYHTEPPITOPIYAH Possii A SOPPEDELNYH STPANAH

PPIMECHANIE: * - abs.chislo syvopotok s Dannym genotypom /% (100 nA s syvopotok ukazannoy teppitopii)

Referencie:

1. 1.Pohjanpelto P., Lappalainen M., Widell A. a al.// Clin.Diagn.Virol.-1996. -Vol.7. -P. 7-16
2. 2.Simmonds P., Holmes E.C., Cha T.A. et al.// J.Gen.Virol.-1993-Vol.74.-P. 2391 -2399