Kritériá kvality imunologických testovacích hormóny

Obe metódy by mali byť konkrétne, citlivé, presné a majú dobrú reprodukovateľnosť. Okrem toho by mala byť vyvinutá metóda analýzy, aby bolo možné merať hladiny hormónov v sére a krvi a plazme, a niekedy aj v moči a slín (v prípade, napríklad, steroidy). Ďalším dôležitým kritériom - minimálny počet a maximálnu jednoduchosť prevádzky, ktoré majú byť vykonané laboratórne personál. Všetky tieto kritériá boli navrhnuté do posledného detailu do konca roka 1960. Vzhľadom na to budeme urobiť niekoľko poznámok a komentárov.

špecifickosť

Jedná sa o najdôležitejšie ukazovateľ kvality akýmkoľvek spôsobom imunoanalýzy. Špecifickosť môže byť určená ako schopnosť metódy pre detekciu len konkrétne vzorka (analytu) látku, a nezistí žiadne cudzie látky, a to aj veľmi podobnou štruktúrou s ním. Inými slovami, špecifickosť - schopnosť metódy, aby sa minimálny počet falošných poplachov. Špecifickosť imunotest je určená predovšetkým špecificita primárnych protilátok. Malo by byť najmä vtedy, ak hormóny pokusy s rovnakými alebo podobnými antigénnych determinant. Napríklad adenogipofizarnye hormónov FSH, LH, TSH a hCG sú zložené z dvoch polypeptidových reťazcov - calamus, kde reťazec sú identické. Ak analýza niektorého z týchto hormónov, ako FSH, ako primárnej protilátky použité nizkospetsifichnuyu polyklonálne antisérum, väčšina z protilátok sa viaže na a-reťazci všetkých štyroch hormónov, takže výsledok merania je falošne pozitívne. Tento jav sa nazýva cross-reaktivita. Krížová reaktivita je pozorovaná pri meraní prolaktínu, ktorý patrí do rovnakej rodiny s rastovým hormónom a placentárnu laktogenu (všetky tieto hormóny sú veľmi podobné N-terminálne aminokyselinová sekvencie).

Špecifickosť polyklonálnych primárnych protilátok môže byť zvýšená imunoadsorpcí na stĺpci antiséra s príslušnými antigénmi. Tento prístup bol široko používaný pred príchodom hybridomové technológie. V okamihu, ako primárny protilátka je takmer vždy používa vysoko špecifické monoklonálne protilátky, ktoré sa viažu na antigénne determinanty sú špecifické pre tento hormón.

Špecifickosť imunochemickej analýzy závisí nielen na vlastnostiach primárnu protilátkou, ale aj z mnohých iných, ktoré sa niekedy nepredvídateľné faktory. Najmä špecificita môže byť znížená v dôsledku skrížené reakcie s primárnymi protilátkami, nejaké neznáme zložky v testovanej vzorke séra alebo plazmy. Sú chvíle, kedy niektoré zmeny srvátkové bielkoviny konformační a pretože toto sa stane antigénne podobnosť s analyzovanej hormónu. A konečne, sérové ​​komponenty môžu byť zavedené do aktívnych miest primárnej protilátky a znížiť špecifickosť ich schopnosť viazať sa na antigén. Imunotest technológie, existuje celý rad spôsobov, ako zabrániť krížovej reakcie, však, možné predvídať všetky prekvapenie.

Video: žiť zdravo! Liečba mužskej neplodnosti

Väčšina imunochemickej testovacie systémy určené na meranie hladiny hormónov v niektorých ľudských telesných tekutinách (sérum, plazma, moč, sliny). V súlade s tým, špecifickosť testovacích systémov založená na týchto biologických tekutín. Ak sa takéto testovacie systémy použitý pre in vitro analýzu hormónov, ako je napríklad po inkubácii endokrinných buniek v pufri Krebs Ringer alebo alebo v každom kultivačnom médiu, je potrebné skontrolovať, či ich špecifickosť najmä v takých "abnormálne" podmienok.

citlivosť

Citlivosť imunochemická testu môže byť definovaný ako minimálna koncentrácia látky, ktorá môže byť meraná týmto spôsobom. Pre posúdenie citlivosti za použitia štandardnej vzorky so známou koncentráciou hormónu alebo iného antigénu. Táto vzorka sa pripraví sériovým riedením vzoriek s klesajúcou koncentráciou hormónov. To znamená, že citlivosť testovacieho systému je priamo úmerná stupňu zriedeniu štandardnej vzorky, s ktorou je možné získať presný výsledok merania. Citlivosť imunochemická testovacieho systému je závislá predovšetkým na afinite primárnymi protilátkami, ktoré sa používajú v ňom. Okrem toho citlivosť závisí od typu imunotest, na ktorom je testovací systém navrhnutý. Všeobecne platí, že citlivé testovacie systémy založené na RIA je vyššia, než je analýza testovacie systémy založené immunohemilyuminestsentnogo a ELISA.

Video: Čo je to jedlo? 5 kritérií. Surové potraviny, fruktoedenie

Pre posúdenie citlivosti za použitia štandardnej vzorky so známou koncentráciou hormónu alebo iného antigénu. Táto vzorka sa pripraví sériovým riedením vzoriek s klesajúcou koncentráciou hormónov. To znamená, že citlivosť testovacieho systému je priamo úmerná stupňu zriedeniu štandardnej vzorky, s ktorou je možné získať presný výsledok merania.

Citlivosť imunochemická testovacieho systému by mala byť taká, že môže byť použitý pre meranie hladiny hormónov sa nachádza nielen v normálnom rozmedzí koncentrácií, ale aj pod týmto rozmedzím. Preto testovacie systémy návrhári snažiť dosiahnuť citlivosti medzi 3. a 5. percentilu alebo noriem v rozsahu dvoch až troch štandardných odchýlok od spodnej hranici normálu. Napríklad rozsah normálne koncentrácie LH u žien je 1,1-77 IU / l (2,3 162 pmol / l). V dôsledku toho je citlivosť testovacieho systému pre meranie LH by mala byť asi 0,4 IU / l (0,84 pmol / l). Táto vysoká citlivosť je obzvlášť dôležité, keď je nutné merať nízke koncentrácie LH, najmä pre diferenciálnu diagnostiku primárne menštruácie. V tejto situácii, hladina LH pod 10 IU / l ukazujú, sekundárne (hypogonadotropným hypogonadizmom), zatiaľ čo vyššie hodnoty - primárnym hypogonadizmom. Imunochemické skúšobný systém musí mať vysokú citlivosť a v tých prípadoch, kedy chcete zachytiť sebemenší zmenu koncentrácie hormónu. Najčastejšie je tento problém vzniká pri plánovaní a hodnotení účinnosti hormonálnu substitučnú terapiu. Napríklad, pri liečbe hypotyreózy dávky levotyroxínu vybraných meraní TSH. Hladina TTG sa pohybuje medzi 0,4 a 4 mIU / l (2,9-29 pmol / l). zatiaľ čo moderné testovacie systémy pre meranie TSH majú citlivosť lepšia ako 0,01 mU / l (0,073 pmol / l). Opakované merania vysoko citlivé TSH umožňujú endokrinológ veľmi presne nastaviť dávku levotyroxínu.

Citlivosť testovacieho systému je závislá predovšetkým na afinite primárnymi protilátkami, ktoré sa používajú v ňom. Okrem toho citlivosť závisí od typu imunotest, na ktorý je vyvinutý testovací systém (analýza RIA immunohemilyuminestsentny, ELISA). Citlivosť analýzy RIA a immunohemilyuminestsentnogo všeobecne vyšší, než je citlivosť testu ELISA, ako je v prvých dvoch spôsobov imunochemickej reakcie prebiehajú v kvapalnej fáze, pričom antigénne determinanty hormónov stali prístupné primárnej protilátky. Avšak, pre účely výskumu a sú vyrobené vysoko citlivý testovací systém založený na ELISA.

presnosť

Tento stupeň blízkosť výsledku merania koncentrácie hormónu k jeho skutočnej hodnoty. Presnosť závisí od citlivosti a systematické chyby v metóde: čím väčšia je citlivosť a tým menšia je chyba, tým vyššia je presnosť. Presnosť imunochemických testovacích systémov bola hodnotená pomocou merania koncentrácie hormónov v štandardných vzoriek.

reprodukovateľnosť

Táto schopnosť imunochemickej testovacia metóda dáva podobné výsledky možné opakované meranie koncentrácie hormónu istej vzorke za rôznych podmienok (v rôznych časoch, v rôznych laboratóriách). Posúdiť reprodukovateľnosť bola použitá ako štandardná vzoriek získaných od pacientov a vzoriek. Pre dosiahnutie vysokej reprodukovateľnosti, laboratórium musí byť plynulý v práci s touto metódou testovacieho systému a meraní za štandardných podmienok (pri rovnakej teplote, rovnaká doba trvania reakcie).

Video: Agresivita Technology - Práca s automatickým biochemickom analyzátora ChemWell-T

Špecifickosť, citlivosť a reprodukovateľnosť je povinné, sú uvedené v pokynoch a záznamových listov pre všetky komerčne dostupné imunochemická testovacích systémov a imunochemickej Autoanalyzer. Avšak, každá laboratórium by mala nezávisle posúdiť všetky tieto nastavenia, zvlášť reprodukovateľnosti, v skutočných prevádzkových podmienkach.