ADAMTS13

Tak, v bežných podmienkach táto proteáza štiepi von Willebrandov faktor multimerů a vytvára normálnu a nízku molekulovú hmotnosť.

Nedostatok ADAMTS13 hrá dôležitú úlohu v patogenéze trombotickou trombocytopenickou purpurou (Moshkovitsa syndróm), pretože zlyhanie tohto metaloproteinázy veľké multimery vWF sú zodpovedné za neriadené tvorbe doštičiek mikroagregátů, blokovanie mikrocirkuláciu. V posledných rokoch zníženie ADAMTS13 nielen nájsť na mikroangiopatia syndrómov, ale aj pri chronickej glomerulonefritídy, sepsa, cirhóza pečene, DIC, a ešte oveľa viac.

princípom metódy

Princíp metódy (ELISA) na základe špecifickej väzby molekúl ADAMTS13 protilátok na povrchu mikrotitračnej doštičky. Po odstránení látky, ktoré nie sú viazané na mikrodoštičky, inkubované s enzýmom značená protilátka (konjugát). Výsledkom je, že na povrchu, na ktorom mikrodoštičiek prístupových protilátok značených enzýmom komplexov k existujúcim génu anti-protilátky. Pridané po umytí 3,3`, 5,5`-tetra-metilbenzidin na vyhodnotenie aktivity enzýmu charakteristika farbiacej testovacej zmesi. Intenzita farby je priamo úmerná aktivite enzýmu a podľa toho, počet ADAMTS13 vo vzorke.

Video: TTP ADAMTS13

Reagenty a zariadenia

• Mikrotitračné jamky potiahnuté protilátkami proti ADAMTS13.
• Vzorka vyrovnávacej pamäte.
• Premývací pufer.
• Roztok chromogénu / substrátu (chromogén - tetrametyl benzidínu podkladu - peroxid vodíka).
• Stop Solution.
• Zariadenie na vykonanie ELISA (podložku, čítačku pre tablety a ďalšie.).

Distribútor Diagnostická súprava činidiel - CJSC "BIOHIMMAK".

Vzorky krvi pre štúdium ako vzorka pre stanovenie koncentrácie ADAMTS13 BTP použitie stabilizovaného citrátu sodného celej krvi.

výkon technika

Postupnosť akcií laboratórium lekár pri určovaní úrovne ADAMTS13 mali prísne dodržiavať pokyny k sade činidiel. Kalibrátory odporúča preskúmať duplicitné definície.

Video: ADAMTS13 Teil 1

Výsledky vyhodnotenia štúdie na stanovenie koncentrácie ADAMTS13 je nevyhnutné pre vytvorenie kalibračnej krivky. Na kalibračnej krivky ležal hodnotu absorbancie získané meraním kalibračných vzoriek. Potom je prepojený bod sa vykonáva kalibračnej krivky pre stanovenie koncentrácie ADAMTS13 ( «point-to-point»). Zvyčajne je koncentrácia ADAMTS13 je 50 až 140%.

Interpretácia výsledkov ADAMTS13 štúdie - metaloproteinázy štiepi von Willebrandovho faktora. Nízka koncentrácia a / alebo zníženú aktivitu ADAMTS13 idiopatickej príčiny trombotická trombocytopenická purpura (Moshkovitsa syndróm). Moshkovitsa syndróm charakterizovaný piatich hlavných klinických prejavoch: neurologické poruchy, dysfunkcie obličiek, hemolytická anémia, trombocytopénia, horúčka. Choroba je obtiažna, bez liečby patogenicky báze mortalita dosahuje 90%. Syndróm Moshkovitsa často vykazujú pokles koncentrácie ADAMTS13 menej ako 10%. Avšak oveľa užitočnejšie pre diagnostiku tejto patológie je stanovenie ADAMTS13 aktivity, ako v tomto prípade, s výnimkou pre kvantitatívne redukcia tejto inhibície môžu byť detekovaná metaloproteinázy autoprotilátky.

Mutácie v géne riadiacej syntézu ADAMTS13, ktorý je schopný určiť časté relapsy trombotická trombocytopenická purpura. Klinické prejavy vrodeným deficitom ADAMTS13 syndrómu tzv Upshaw-Schulman (Upshaw-Schulman). V tejto úrovni syndróm ADAMTS13 je menšia ako 6,7%.

V čase písania monografií, bohužiaľ, nie sú definované jednoznačne odlišujúce vlastnosti trombocytopenickej purpury a hemolytický uremický syndróm. Avšak, väčšina expertov majú tendenciu sa domnievať, že hemolyticko-uremický syndróm, nie je pozorované zníženie ADAMTS13, takže táto hodnota je veľmi významné pre diferenciálnu diagnostiku takýchto život ohrozujúcich podmienkach.

príčiny chýb

• Zlyhanie teplotný režim ukladania činidlo.
• umývacie Porušenie postupy (v prípade ručného premývania sa premyje aspoň 4 krát).
• Zmiešanie činidlá z rôznych šarží.
• Kondenzácii vlhkosti v jamkách (aby sa zabránilo výskytu kondenzácie by nemala byť otvorená do obalu, kým sa ohrieva na teplotu miestnosti).

Ďalšie prídavok analytická technika činidiel pre meranie koncentrácie ADAMTS13 existuje metóda na stanovenie aktivity metaloproteinázy. Nedostatok aktivity spôsobený mutáciou alebo prítomnosť autoprotilátok proti ADAMTS13.