Fagocytárnej aktivity dendritických buniek. Imunofenotypoch dendritických buniek

dendritické bunky, odvodený od buniek kostnej drene myší boli testované na schopnosť fagocytózy. Fagocytárnej aktivity DC v rôznych štádiách diferenciácie, aktivovaný Immunovac-PE-4, a klasický induktor ACO zrenia TNF-a, bola hodnotená na absorpčnú proti kmeňom S. aureus a S. typhimurium. Ako kontrola boli použité makrofágy, ktoré boli pripravené z rovnakých buniek kostnej drene ich kultiváciou s GM-CSF po dobu 7 dní.
Nezrelé dendritické bunky aktívnejšie fagocytované baktérií na rozdiel od DC pôsobí Immunovac-VP-4, ACO a TNF-a.

Fagocytárnej aktivity makrofágov a dendritických buniek bol skúmaný na dynamike proti S. aureus a S. typhimurium.
Najaktívnejší boli makrofágy, fagocytárnu index je s ohľadom na S. aureus Po 30 minútach inkubácie bol 86,0 ± 4,8%, a zostal na vysokej úrovni po dobu troch hodín pozorovania.

fagocytárnu aktivita nezrelé DC stimulované a imunomodulátory mikrobiálneho pôvodu, boli významne odlišné.
Keď pridal sa k streda kultiváciu TNF-a alebo Immunovac-VI-4 (skupiny 2 a 3) sa fagocytárnu aktivita bola významne nižšia, s prídavkom Immunovac-VP-4 index fagocytárnu bola o niečo vyššia ako v prípade, že pod vplyvom DC zrenia TNF-a. Pod vplyvom SOA tiež ukázala pokles fagocytózy DC, ale jeho hladina bola vyššia ako Immunovac-VP-4, ktoré môžu indikovať prítomnosť v kultúre nezrelých DC a makrofágy. Pri porovnaní stupňa fagocytózy S. aureus a S. TY-phimurium významné rozdiely boli nájdené.

dobre pravdepodobne, že čím vyššia je aktivita absorpčných baktérie dendritické bunky stimulované Immunovac-VP-4 a expresie ACO vplyvom Toll-like receptorov na DC a makrofágov, ktoré majú afinitu pre patogén asociované štruktúry baktérií. Po reakcii s bakteriálnou produktmi, DC, prenesená do nového funkčného stavu, čo sa odráža v znižovaní fagocytárnej aktivity a schopnosť silnejší antigén prezentácie v porovnaní s makrofágy.

študovať immunophenotypic charakteristiky dendritických buniek v rôznych štádiách dozrievania boli vykonané za použitia flyuorestseinizotiotsianat a PE-značenej monoklonálne protilátky Company, USA «Caltag».

Stupeň diferenciácie a Zrelé dendritické bunky, odvodený od pečeňových buniek embryonálnych myšiach bol stanovený zmenou úrovne expresie diferenciačných molekúl CD34, CD38, CD40, CD80, CD86, CD83, F4 / 80, MHC I, MHC II po 3 dni po pridaní na nezrelé dendritické bunky Immunovac-VP-4, bakteriálne lyzát K. pneumoniae, alebo TNF-a.

zistenie show , Že TNF-a a Immunovac-VP-4 vo študovaných koncentráciách stimulovaných DC dozrievania. Avšak, súdiac podľa expresie diferenciačných markerov, TNF-a aktivovaného DC zrenie vo väčšom rozsahu, než Immunovac-VP-4 a lyzátu K. pneumoniae. Koncentrácia 25 ug / ml Immunovac-PE-4 bol optimálny pre indukciu DK- zrenia za týchto podmienok je hladina expresie kostimulačný molekúl bola vyššia. Avšak expresia F4 / 80 molekúl na DC stimulované Immunovac-VP-4 a lyzátu K. pneumoniae, zostala zvýšená (23,8 ± 2,6% a 21,2 ± 3,4%, v danom poradí) v porovnaní s DC, spracuje sa TNF-a (0,6 ± 0,2%).

Skúmalo sa tiež, imunofenotypoch dendritických buniek, odvodený od buniek kostnej drene myší. Ako zrenia induktory používa imunomodulátory bakteriálneho pôvodu - Immunovac-VP-4 GMDP, ASO, a ako kontrola - lyzátu LPS a K. pneumoniae, a TNF-a.

Aktivácia buniek cez Immunovac-VI-4 GMDP a vedie k maturácii buniek. Zvyšuje expresiu kostimulačný molekúl, CD38 adhézne molekuly. Tak boli koncentrácie, použité Immunovac-PE-4 malo rôzne účinky na úrovni MHC. V dávke 25 ug / ml MHC expresie mi bolo 2,7 krát vyššia ako v koncentrácii 50 ug / ml. expresie MHC II bola vysoká u oboch dávok a nemá žiadne významné rozdiely. GMDP zvýšený obsah DC vyjadrenia MHC triedy II.

použitie lyzát K. pneumoniae a LPS zvýšenú hladinu expresie kostimulačný molekúl MHC molekuly, ktoré predstavujú antigénne I a II.

Pri použití ACO ako induktora DC zrenie markeru CD34 expresie prešiel významné zmeny ako funkcia dávky. Jeho dynamika pozorované len pri najvyšších dávkach. Pri použití ARF v dávke 0,3 EU / ml zvýšenú CD80 obsahu, CD86, MHC I-exprimujúcich buniek. Avšak úroveň CD86 bola nižšia ako u iných induktorov zrenia. Expresia markerového F4 / 80 na jednosmerný prúd, stimulované Immunovac-VI-4 môžu byť spojené s prítomnosťou bakteriálnych LPS vo vakcíne. Tieto výsledky sú potvrdené schopnosti DC získaných skôr liečených s LPS, expresné antigény nielen zrelé DC, ale aj receptory pre LPS.

nasledujúce pokusy Študovali sme expresiu týchto markerov v kombinácii immmunomodulyatorov mikrobiálneho pôvodu (IMMP) s TNF-a. Kultivácia DC v prítomnosti GM-CSF a IL-4, s pridaním na šiesty deň 2,5 ng / ml TNF-a a IMMP DC zrenie stimulované vo väčšej miere, než je dávka TNF-a, a zníženej údržby v kultúre makrofágov. Samo o sebe je TNF-a v koncentrácii 2,5 ng / ml (skupina 3) neindukuje DC zrenia, kedy v porovnaní s kontrolou (skupina 2), CD34 nezrelé markeru bola 5-krát vyššia, F4 / 80 - 11,4 krát, to naznačuje, že existuje značný záujem v kultúre makrofágov. Avšak, keď došlo k koinkubatsii 2,5 ng / ml TNF-a výraz s imunomodulátory zvýšenie CD38 adhézne molekuly, kostimulačný molekuly CD40, CD80, CD86 a MHC I a triedy II.

obzvlášť to platí pre ASO, koinkubatsiya preto, že sa TNF-a stimulovanou expresiu povrchových markerov špecifických pre DC. To znižuje CD34 marker, v porovnaní s nezrelým DC (skupina 1) o 3,4 krát, zvýšenej expresiu adhéznych molekúl CD38 3,2 krát, kostimulačný molekúl CD40 38 krát, CD80 a CD86 takmer 9 krát, MHC I, 2, 7 a MHC II 1,5 krát, hladina makrofágov markeru sa znížil o 3,6 krát. Po vstupe do kultivácie sa médium TNF-a a Immunovac-VI-4 je tiež zistilo, stimulačný účinok, vyjadrujúce, že sa významne zvýšila expresiu MHC I a II a znížený obsah F4 / 80 v porovnaní s pôsobením Immunovac-VI-4 v rovnakej dávke (tabuľka. 7). Podobné výsledky boli získané s kombináciou TNF-a (2,5 ng / ml) a GMDP, ale expresia CD40, CD80, CD86 a MHC II, bola väčšia v prípade, že kombinácia TNF-a a Immunovac-VP-4.
zistenie show, že zavedenie do kultivačného média malé množstvo TNF-a zvyšuje potenciál DC zrenia pod vplyvom imunomodulátory mikrobiálneho pôvodu.