Obsah Očné-glutámová kyselina vo vlhkej komory u pacientov s primárnou glaukómu s otvoreným uhlom

Mnoho autorov glutamát omietky neurotoxiceffect na gangliové bunky sietnice. Je možné, že glutamicacid zvýšenie koncentrácie v očných tkanivách s primárnym otvoreným angleglaucoma (POAG), hrá dôležitú úlohu v optickom nerve glaucomaatrophy patogenéze.

Komorová 10 pacientov s POAG boli nadobudnuté počas cataractextraction a vyšetriť. Množstvo kyseliny glutámovej weredetermined chromatografickú metódou.

koncentrácia kyseliny glutámovej v komorovej kontroly groupwas 28,6 ± 1,6 mkg / ml a v skupine so POAG - 84,9 ± 28,7 mkg / ml.The rozdiel nebol štatisticky spoľahlivý. Preto je atendency na glutámovú kyselinu zvýšenie koncentrácie v očiach withPOAG.

PAnály výskum poslednihlet významne ovplyvní prezentáciu patogenéze zrakového nervu glaukomatoznoyatrofii - glaukómové optické neuropatia.

Bolo zistené, že charakteristika je prejavom neuropatie glaukomatoznoyopticheskoy apoptózy - smrť kontraktúra kletoksetchatki. Quigley [6], sa domnieva, že poškodený môže vsledstvievysokogo IOP axon gangliových buniek sietnice nenesie dostatochnoyinformatsii, čo vedie k aktivácii mechanizmu prirodzeného gibelikletki. Možno, že tieto procesy sú aktivované nedostatochnostyukrovotoka ciev v oku pri zvýšenej IOP. Ukázalo sa chtoodnovremenno s tým existuje významné zvýšenie kyseliny soderzhaniyaglutaminovoy (glutamát), v sklovci pacientov pervichnoyotkrytougolnoy glaukóm (POAG). Glutamát je hlavný neyromediatoromTsNS a sietnice. Zároveň sa zvyšuje glutamatavyshe fyziologické úrovne koncentrácie v sietnici spôsobuje blokádu mezhneyronalnoyperedachi nervové impulzy a v kombinácii so selektívnymi apoptozomganglioznyh buniek sietnice v dôsledku neurotoxické účinky glutamátu [5]. Brooks D.E. a kol. [7] nájsť v psích očí s glaukómom eksperimentalnovyzvannoy zvýšený obsah vitreální glutamátu, tryptofán, a nízkym obsahom glycínu v porovnaní s kontrolem.Po Podľa autorov, vysoká koncentrácia glutamátu je toxický dlyagangliev retinálnej ischémie mechanizmus dokazuje poruchy vyskytujúce sa v bunkách sietnice.

Samotná myšlienka neurotoxické pôsobenie glutamátu na nervnuyutkan najmä gangliové bunky sietnice, zaimstvovanaiz neurologické praxi. Neurológov 20 rokov znacheniebolshim dávajú koncentrácie vysielača vo vývoji takých ochorení, ako je Alzheimerova choroba, roztrúsená skleróza, demencia, amiotroficheskiybokovoy skleróza a ďalšie [4]. Zvýšené hladiny glutamatav sklovca pacientov s glaukómom, smrť ganglion kletoksetchatki pod jeho vplyvom v pokusoch na potkanoch nechá E.B.Dreyer et al. [6] naznačuje, že mechanizmus ich mieste a gibeliimeet POAG. Avšak, príčina intracelulárnym vypuskaglutamata nie je celkom jasné. E.B. Dreyer a kol. [6] veria, že možno vysoký vnútroočný tlak spôsobuje vyhoduglutamata do intracelulárneho priestoru, indukciu bunkovej smrti, ktorá je toxická pre gangliových buniek. Druhá pravdepodobné prichinoygibeli bunky, podľa autorov, je zlyhanie enzýmových systémov zodpovedných za zničenie neurotransmiteru z synapsie po vyhodaego. Obtiažnosť potvrdzujúci tieto názory zaklyuchaetsyav, že je veľmi ťažké overiť fakty o "živej" oko však nepochybné, že veľkou koncentráciou gutamata toksichnydlya nervové tkanivo.

Vzhľadom na vyššie uvedené je cieľom našej štúdie bolo obnaruzhenieglutamata u pacientov s POAG.

Materiály a metódy

Experimentálne skupina pozostávala z 10 pacientov s POAG (6 mužov, 4 ženy, priemerný vek - 74 rokov), ktorí zabiralaskamernaya vlhkosti počas extrakapsulárnu extrakciu kataraktys antiglaukomatoznyh zložky. 8 pacientov sa vyvinula stadieyPOUG 2 s ďaleko pokročilých. Kontrolný skupinu tvorilo bolnyeso senilná katarakta - 14 pacientov (11 mužov a 3 ženy, priemerný vek - 68 rokov). Medzi hlavné a kontrolnej skupiny bylisopostavimy vek a somatické ochorenia.

Základom metódy opísané Bode a dal Giri metódy kolichestvennogoopredeleniya deriváty aminokyselín vo forme medi s ningidridinomposle ich chromatografickým delením na papieri v tejto modifikácii [1].

1. Príprava vzoriek na analýzu. Objem vzoriek kamernoyzhidkosti 0,1-0,2 ml Odvážte na analytických váhach, a odparí sa do sucha na vodnom kúpeli pri 40 ° C v mikrotitračných doštičkách s použitím skla plávajúce statív. Suchý zvyšok sa rozpustí v 0,05 mldistillirovannoy vode.

2. Získanie rozmerové chromatogramov zhidkostiglaza komora. 20 l získaného roztoku v dávkach po 5 Aj s pomocou automatickej pipety sa nanesie na chromatografickú bumagumarki "rýchlo" veľkosti 2 x 27 cm. Spôsob chromatografie provodyatniskhodyaschim dvakrát, najprv v jednom smere smesirastvoriteley I, potom dvakrát zmesou II. Zmes I: n-butilovyyspirt, ľadová kyselina octová, destilovaná voda (4: 1: 5). Zmes II n-butylalkoholu, ľadovej kyseliny octovej, distillirovannayavoda (40: 15: 5). Po každom odovzdaní bumaguvysushivayut rozpúšťadla na vzduchu a potom sa umiestni do chromatografickej rozpúšťadlové kameru.Vremya priechodu v jednom smere 7 hodín. Vysushennuyuhromatogrammu ponorí na niekoľko sekúnd do 0,5% roztoku ningidrinav acetónom, vysuší sa, aby sa stal jasnejší po deň poetomuopredelenie kvantifikáciu aminokyselín v priebehu niekoľkých minút na vzduchu pri teplote 50 ° C počas vývoj amino okraski.Pyatna ipodogrevayut 10 minút v peci, aby sa ďalšie provoditna deň.

3. Kvantitatívne stanovenie kyseliny glutámovej v kamernoyzhidkosti oka. Červené škvrny zodpovedajúce glutaminovoykislote sú vyrezané, rozreže na malé kúsky a umiestni sa do mikroskúmavky obsahujúcej 0,25 ml alkoholického roztoku síranu meďnatého. Fioletovayaokraska stáva oranžovo-červené obrazovaniyamednogo výsledného aminoderivát s ninhydrínom pomocou. extrakcia Prodolzhayutv po dobu jednej hodiny pri teplote miestnosti. Intensivnostokraski merané na photoelectrocolorimeter Humalyzer 2000 pridline vlnovej dĺžke 505 nm, v microcuvettes nabumagu proti kontrolná vzorka. Výpočty založené na obsahu aminokyselín sa vykonáva kalibrovochnomugrafiku získané zo štandardných roztokov kyseliny glutámovej.

4. Konštrukcia kalibračnej krivky. Gotovyatrastvory glutamová kyselina 0,001 M, 0,00075 M, 0,0005 M, 0,000375M, 0,00025 M. V článku je aplikované na 20 ul riešenie. Proizvodyatpo vzorec pre výpočet:

K = (C x 5 x 10^-2) / V

A - koncentrácia kyseliny glutámovej v vlhkosti komore (ug / ml), C - obsah kyseliny glutámovej nájsť na kalibrovochnomugrafiku (ug / ml) - V - objem vzorky (ml).

Výsledky a diskusia

obsah glutamátu vlhkosti v komore kontrolnoygruppe bola 28,6 ± 1,6 ug / ml, s POAG - 84,9 ± 28,7 mikrogramov / ml (rozdiel nie je štatisticky významný, p>0,05).

Aj keď nie sú získané a štatisticky významné rozdiely vsoderzhanii pacientov POAG glutamanu a vek katarakta odnakoimeetsya jasný trend smerom k vyššej koncentrácii vlhkosti neyromediatorav komory POAG pacientov. U 5 z 10 pacientov s POAG soderzhanieglutamata bol vlhkosti komore výrazne vyššia ako v kontrolnoygruppe a v rozmedzí od 37,6 pg / ml do 260.3 mikrogramov / ml.

U pacientov s najvyššou koncentráciou katarakty stareckých pacientov glutaminovoykisloty bola len 33 mg / ml.

Účasť niektorých neurotransmiterov v nariadení oftalmotonusapokazano v dielach A. Myagkova [2,3], ktorý dokázal, vliyanieopioidnyh peptidy k zvýšeniu vnútroočného tlaku, pôsobiace elektricheskimikolebaniyami a chemické podnety na amygdaloid kompleks.V výsledkov získaných dát nemôže súhlasiť s gipotezoyusileniya apoptózy gangliových buniek sietnice v POAG vsledstvienakopleniya kyselín v ňom glutámová. Avšak, toto gipotezatrebuet ďalšie štúdium.

Štúdie ukázali prvýkrát v komore glutaminovuyukislotu vlhkosti u pacientov s POAG. Obsah glutamatau pacientov Poag ako v kontrolnej skupine.

1. Lekárska laboratórna technika a diagnostika: technológie Meditsinskielaboratornye. Odkazom na 2 objemy / ED. A.M.Karpischenko // stanovenie mikrometóda voľných aminokyselín v syvorotkekrovi pomocou papierovej chromatografie. V.2. - St. Petersburg, "Intermedika", 1999 - S. 106-109

2. Mäkké AV Vplyv prepichnutie očné vplyvy spôsobené elektrickým a chemickým stimulácia mindalevidnogokompleksa: Avoref. diss. Na soisk. vedci. krokom. cand. med. nauk.- Kazan, 1997-1921.

3. Soft AV Účasť opioidných peptidov v centrálnej tlaku regulyatsiivnutriglaznogo a hydrodynamických očí // Proc. Dokladov7sezda ophthalmologists Rusko. - M., 2000.- S.175-176.

4. Plyahin IV Biochemická základ predĺžená kletochnoysmerti. // Medzi medziregionálnej zbierky vedecké. Práca / Biochémia narubezhe XXI storočia. - 2000.- Ryazan. - S.173-177.

5. Shamshinova AM Zueva MV, Tsapenko IV, Jakovlev AA Neyrofiziologicheskieosobennosti sietnice a možné klinické Elektroretinografia .// Vestn. Oftalmol. - 1996.- №2.- S.52-55.

6. Výskyt glaukómu v dokumente // slackinc.com), očnej chirurgie News International Edition, 15. december 1996

7. Vitreousbody koncentrácia glutamátu u psov s glaukómom / Brooks D. E., G. A. Garcia, Dreyer E.B. vôbec // Am. J. Vet. Res. - 1997.- Vol.58, N8.- P.864-867