Gen anomálie protrombínu 20210 g / a

V rodinách pacientov s trombóza zistená autozomálne dominantné dedičnosti F2: 20210 G / A.

V súčasnej dobe spojená s touto genetickou anomáliou s nadprodukciou protrombínu. Avšak, aj napriek technické schopnosti určiť zvýšené hladiny protrombínu, detekcia tohto ochorenia by mala byť založená výlučne na PCR dát vysokej citlivosti a špecifickosti PCR poskytujú v oligonukleotidov in vitro syntetizuje komplementárne k zodpovedajúcej časti ľudského génu protrombínu.

princípom metódy

Pre identifikáciu polymorfných alel v amplifikáciu F2 génu s použitím príslušných častí génu pomocou PCR s následnou detekciu amplifikačních produktov.

Reagenty a zariadenia

• Pre určenie anomálie F2: 20210 G / A sa používa nasledujúce praymerypraymer 1 (dopredný primer) - 5'-TGGGAAATATGGCTTCTACA-3` (nukleotidy 20035-20054) - Primer 2 (reverznej primer) - 5'-CACTGGGAGCATTGAAGCT-3` (nukleotidy 20229- 20211).
• Kontrolné vzorky s divokou alely a mutantný alely.
• Zosilňovače a iné zariadenia na vykonávanie PCR.

Vzorky krvi pre štúdie pre výskum materiálu môže byť akýkoľvek zdroj DNA, ale žilovej krv je používaný, ktorý sa do skúmaviek obsahujúcich EDTA vzorky boli skladované pred začiatkom štúdie, pri teplote 2 ... + 8 ° C po dobu až 24 hodín. Vzorky boli skladované Long môžu byť zmrazené pri -40 ° C ..- 70 ° C

Izolácia DNA z klinických vzoriek materiálu sa môže vykonávať rôznymi spôsobmi, napríklad pomocou súpravy na báze oxidu kremičitého, nastaví mikroodstredivke stĺpce sady založené na extrakciu fenol-chloroformom, a ďalšie.

výkon technika

Metóda je založená na oblasti viacnásobné kopírovanie volebnej DNA s použitím in vitro enzýmu. Pokrok v štúdii musia spĺňať vybrané zariadenia a postup analýzy PCR (gélová elektroforéza, blesk a podobne.).

Vyhodnotenie výsledkov štúdie

Vyhodnotenie výsledkov sa uskutoční spôsobom, ktorý umožňuje vizualizovať oligonukleotidy polymorfné striedanie. DNA fragmenty boli stanovené s použitím rôznych fluorescenčných farbív, ktoré sa špecificky viažu na DNA.

Interpretácia výsledkov prieskumu

Pre mnoho nosičov polymorfizmu charakteristické odlišným lokalizácia trombózy, riziku, ktoré v prítomnosti tehotenstve, užívanie orálnej antikoncepcie podstatne zvyšuje, v pooperačnom období, a ďalšie. Neúplné penetrácia génu, v tomto ohľade, niektorí dopravcovia nemajú históriu trombotických porúch. V prítomnosti tohto polymorfizmu varianty homozygotnou veku prvého dielu je menšia, a frekvencia a závažnosť trombózy vyššie. Detekcia heterozygotná frekvencia anomálií, podľa literatúry, je v populácii asi 1-2%. V prítomnosti F2: 20210 G / A protrombín u pacientov s asi 1,5 až 2 krát vyššia, než je obvyklé.

Zistenie, že anomálie protrombínového génu u pacientov s recidivujúce trombózy doložiť umožňuje predĺžené antikoagulačný profylaxiu. Takýto výskum pomáha identifikovať tehotných žien so zvýšeným rizikom trombózy.

príčiny chýb

• Chyby pre-analytické fázy štúdie (v porušeniu podmienok skladovania alebo spôsob dopravy biomateriálov nukleových kyselín možno rozobrať, čo spôsobuje falošne negatívne na výsledky heparín môže inhibovať reakciu PCR, takže krvné vzorky nesmú byť vykonaná v skúmavkách obsahujúcich antikoagulant).
• Kontaminácia vzoriek cudzí biologický materiál.
• Porušenie zásad územného laboratória pre molekulárne genetických štúdií.
• Odmietnutie študovať negatívnu kontrolu.
• Odmietnutie vykonať opätovnú analýzu pozitívnych vzoriek.
• Zlyhanie izolácie DNA techník.
• Špecifickosť a citlivosť PCR primérov v podstate závisí od štruktúry, takže použitie primerov od rôznych výrobcov môže spôsobiť odlišné výsledky.

Iné analytické PCR Technology Rôzne prevedenia sú považované za spoľahlivé laboratórne postupy, ktoré môžu poskytnúť vysokú citlivosť, špecifitu a reprodukovateľnosť. Napriek existencii technických možností pre identifikáciu zvýšené hladiny protrombínu, diagnóza trombofília by mala byť založená výlučne na použitie PCR variantov.