Faktor Leiden

Ako bolo uvedené vyššie, gén abnormalita z koagulačného faktora V, G 1691>A bol objavený v roku 1994 R. Bertina et al. Jediný nukleotidu substitúcia guanínu na adenín v polohe 1691 (1691 G>A) v exónov 10 géne F5 spôsobuje molekulárnej defekt koagulačného faktora V. Pretože výmena v polohe 506 molekuly proaktselerina arginínu na glutamín (Arg506Gln) narušený jeho schopnosť k zrúteniu, čo má za následok vznik dysfunkcie systému C antikoagulačného proteínu a s tendenciou k recidívam trombózy. Genetické abnormality koagulačného faktora V (Leiden) je najčastejšou trombofilná defekt v európskej populácii.

Pre detekciu genetických abnormalít prevedení s použitím PCR. Vysoká citlivosť a špecifickosť PCR poskytujú v oligonukleotidov in vitro syntetizuje komplementárne k zodpovedajúcej oblasti génu ľudského koagulačného faktora V.

Nedostatok jednotnej klasifikácie genetických chýb spôsobilo rozšírené v súčasnej vedeckej literatúre početné príznaky tejto anomálie: F5: 1691 G>A, Rs6025, Arg506Gln, G1691A, R506Q, Leiden (leydenovskaya) a ďalšie.

princípom metódy

Pre identifikáciu polymorfných alel v amplifikácia génu F5 použitím príslušných častí génu pomocou PCR s následným stanovením amplifikačních produktov.

Reagenty a zariadenia

• Kontrolné vzorky s divokou alely a mutantný alely.
• Pre určenie anomálie F5 1691 G>Bolo použité dva primery. Primer 1 (dopredný primer): ACGTTGGATGC TGAAAGGTTACTTCAAGGAC, primer 2 (reverznej primer): ACGTTGGATGCTCTGGGCTAATAGGACTAC.
• Zosilňovače a iné zariadenia na vykonávanie PCR.

Vzorky krvi pre štúdie pre výskum materiálu môže byť akýkoľvek zdroj DNA, ale žilovej krv je používaný, ktorý sa do skúmaviek obsahujúcich EDTA. Vzorky boli uložené pred začiatkom štúdie, pri teplote 2 ... + 8 ° C po dobu až 24 hodín. Long uložené vzorky môžu byť len v zmrazenom stave pri teplote -40 ° C ... 70

Izolácia DNA z klinických vzoriek materiálu sa môže vykonávať rôznymi spôsobmi, napríklad pomocou súpravy na báze oxidu kremičitého, nastaví mikroodstredivke stĺpce sady založené na extrakciu fenol-chloroformom, a ďalšie.

metódy stanovenia

Metóda je založená na oblasti viacnásobné kopírovanie volebnej DNA s použitím in vitro enzýmu. Pokrok v štúdii musia spĺňať vybrané zariadenia a postup analýzy PCR (gélová elektroforéza, blesk a podobne.).

VIDEO: Holandsko, Noord-Holland. Part1. 06-2011

Vyhodnotenie výsledkov štúdie

Vyhodnotenie výsledkov sa vykonáva tak, aby vďaka polymorfné oligonukleotid domova výmenu. Príklad vizualizáciu výsledkov amplifikácie je znázornené na obr. 5.1.

Video: všetky mestá a krajiny sveta na jednom mieste

Prevedenie leydenovskoy anomálie výsledky detekcie z génových koagulačného faktora nasledujúce: G / A - heterozygotná anomálie formuláre v polohe 1691- A / A - homozygotnou anomáliu. Populácia prevažuje genotyp G / G.

Interpretácia výsledkov prieskumu

Nosičov leydenovskoy F5 génové abnormality sú náchylné k trombóze, čo výrazne zvyšuje riziko v tehotenstve, používanie orálnej antikoncepcie, v pooperačnom období, a ďalšie. Gene penetrácia je neúplná, teda počet nosičov nemá históriu trombotických porúch. V tomto prevedení je prítomnosť homozygotnou mutácie frekvencie a závažnosti trombózy vyššie. Detekcia heterozygotná frekvencia anomálií, podľa literatúry, je v populácii asi 1-3%.

Substitúcia aminokyseliny v polohe 506 poskytuje miesto štiepenia molekuly koagulačného faktora V, aktivovaný proteín C, čo výrazne znižuje rýchlosť jeho degradácii. Preto je prítomnosť génu anomália F5 G 1691>Odpor pozorované koagulačný faktor Va podľa aktivovaný proteín C.

Detekcia tejto mutácie u pacientov s rekurentnou trombózou umožňuje ospravedlniť predĺženej antikoagulačnej profylaxie. Táto štúdia môže pomôcť identifikovať jedincov, ktorí potrebujú, aby rozhodli o použití antikoagulancií pri vykonávaní operácií.

Video: Dr. Elena Berezovskaya - Thrombophilia a tehotenstvo

príčiny chýb

• Chyby pre-analytické fázy štúdie (v rozpore dobe skladovania alebo spôsob dopravy biomateriálov nukleových kyselín možno rozobrať, čo spôsobuje falošne negatívne na výsledky heparínu je schopný inhibovať PCR, takže krvné vzorky nesmú byť vykonaná v skúmavkách obsahujúcich heparín).
• Kontaminácia vzoriek cudzí biologický materiál.
• Porušenie zásad územného laboratória pre molekulárne genetických štúdií.
• Odmietnutie študovať negatívnu kontrolu.
• Odmietnutie vykonať opätovnú analýzu pozitívnych vzoriek.
• Zlyhanie izolácie DNA techník.
• Špecifickosť a citlivosť PCR primerov závisí najmä od štruktúry, takže použitie primerov od rôznych výrobcov, môže spôsobiť, že sa získaním odlišné výsledky.

Ďalší analytické techniky

PCR varianty bolo zistené, že spoľahlivé laboratórne postupy, ktoré sú schopné zabezpečiť vysokú citlivosť, špecifitu a reprodukovateľnosť. Vo väčšine prípadov trombofilné pre diagnostiku ochorení, pri ktorom poruchou proaktselerina inaktiváciu môžu byť použité spôsobom koagulačné stanovenie rezistencie na aktivovaný proteín C. Poznámka, však, že iné poruchy (hyperproduction Antihemophilic globulín, VA a kol.) Sú tiež schopné indukovať rezistenciu koagulácie faktora V na aktivovaný proteín C