Hlavné prístupy pre prenatálnu diagnostiku genetických ochorení. Priama diagnostika genetických abnormalít.

Metódy molekulárnej diagnostiky - hlavný produkt a primárna štruktúra analytický nástroj, tj. sekvencie nukleotidov v molekule DNA - genóm základňa (dedičný prístroj) človek. Prvá etapa veľké International rozlúštenie molekulárnu štruktúru DNA ľudského výskumného programu bola dokončená v roku 2000, čo vytvára "návrh ľudského genómu." V tejto sekcii sa obmedzíme na popisujúce základné princípy metód DNA báze. Podrobnejšie sa technikou molekulárnej štúdii nájdete v špeciálnych monografií a učebníc.

Na báze DNA diagnostické metódy, zamerané na identifikáciu mutácie alebo molekulárnej zmutovaný chromozóm označenie je polymerázová reťazová reakcia syntézy DNA (PCR). Historicky staršie metóda blot hybridizácia Southern sa v súčasnej dobe používa oveľa menej často, aj keď sa používajú na identifikáciu jednotlivých mutácií, najmä dynamických mutácie ", čo vedie k rozšíreniu ochorenia (syndróm fragilného X chromozómu, miotonicheskayadistrofiya, Huntingtonova chorea, množstvo neurodegeneratívnych ochorení) a hemofília a, a niektoré ďalšie choroby.

Bola navrhnutá metóda PCR v roku 1983 u amerického vedca Curry Mullis priznanej tohto objavu Nobelova cena v roku 1993, spôsoby ich prípravy selektívne umožňuje (zosilnený) in vitro relatívne malé DNA segmenty a dĺžku od niekoľkých desiatok do niekoľkých kilobází, za použitia templátu DNA z akejkoľvek obsahujúce amplifikovanej sekvencie.

potrebný Podmienkou pre PCR je znalosť nukleotidovej sekvencie amplifikovaného DNA oblasti, ako je konkrétny voľba miesta sa vykonáva hybridizáciou templátové DNA s dvoma umelo syntetizované primer - DNA oligonukleotidové sekvencie, obvykle od 15 do 30 bp komplementárne 3`-konci amplifikovaného úseku ku zmysle a antisencie vlákna DNA, resp. Vzdialenosť medzi priméry určuje dĺžku syntetizovaných molekúl. Podrobnosti o Technika produkcie PCR možno nájsť v príručkách.

PCR Ten sa stal hlavným v molekulárnej diagnostiku genetických chorôb. Vyvinutý a široko používané v praxi, rôzne varianty tejto metódy, aby rýchlo a efektívne identifikovať mutácie, štúdium DNA polymorfizmov používaných na molekulárnej označovanie mutantných chromozómov.

V súčasnej dobe existujú dva základné prístupy k prenatálnej diagnostiky, ako aj všeobecne diagnostiku genetických chorôb:
- priamy diagnóza na základe okamžitej identifikáciu mutácií v špecifického génu;
- nepriamo (vedľajšia) diagnostiky, ktorý je založený na označovanie mutovaného génu (niekedy označovaný ako označenie "pacient", chromozóm nesúci mutantný gén) pomocou molekulárnych markerov.

Priama diagnostika genetických abnormalít

Prostredníctvom priamej diagnostike Identifikácia mutácií v géne. Výhody spôsobu - vysoký (blížiace sa 100%) diagnostickej presnosti, možnosť PD a informatívne analýzu (vhodnosti pre molekulárnu diagnostiku) rodiny a identifikáciu heterozygotných nosičov v neprítomnosti detského pacienta.

na žiadne veľké génové mutácie To si vyžaduje detailné molekulárnej analýza (skenovacia) primárny štruktúry génu pre detekciu mutácií, ktoré možno pripísať na nedostatky tohto spôsobu.

Základom akejkoľvek monogenní choroby sú porušovanie génových funkcií, spôsobené rôznymi mutáciami v jeho sémantickej časti, tj, génová sekvencia kódujúce proteínovú syntézu (cDNA). Typ a mutácie spektra, rovnako ako ich fenotypovú expresiu (závažnosť choroby) sú špecifické pre každý gén, a je do značnej miery daný unikátnymi vlastnosťami jeho primárny štruktúry (nukleotidovej sekvencie).

Je tiež známe, že frekvencia odlišná mutácie v každom géne sa líšia. Tam sú časté "vyššej moci" mutácia, diagnostická hodnota, ktorá je zvlášť vysoká, a "minor" (single sporadický), registrácia extrémne zriedkavé. Pre mnohých z génov zodpovedných za dedičných chorôb, mutácie spektra sú dobre skúmať a rozvíjať optimálne algoritmy pre ich identifikáciu. Napríklad, pozitívne na gén pre cystickú fibrózu je delF508 mutácia, ktorý sa nachádza v takmer 50% všetkých mutantov chromozómov u pacientov s CF v Rusku pre génovú fenylalanín - to R408W mutácia detekovaná Y45% pacientov s fenylketonúriou v Rusku, na gén pre dystrofín, ktoré sa vyznačujú dostatočne veľké delécie, zaznamenané v 60% X chromozómov u pacientov s DMD, atď

viac podrobností Algoritmy pre molekulárnu diagnostika paleta monogenních chorôb sú uvedené v špeciálnych sprievodcoch, recenzie.