Nepriama diagnostika genetických chorôb. Presnosť molekulárnej diagnózy možné zdroje chýb.

Nepriama (nepriamy) prístup k molekulárnej diagnostiky Historicky je staršia a univerzálnejšie. Je založený na analýze intra- a vnegennyh polymorfných miest. Ako druhý normálne vyčnievať krátku sekvenciu DNA rovnakých homológnej oblasti chromozómu, ktoré sa líšia v primárnej štruktúre. Tieto diagnostické polymorfné miesta môžu byť umiestnené buď v samotnom géne alebo v jeho bezprostrednej blízkosti.

Nevyhnutnou podmienkou pre diagnostiku nepriame DNA Je to prítomnosť v rodine chorého dieťaťa alebo možnosť študovať jeho DNA (krvné škvrny, histologické preparáty atď.) Stanovenie obsahu informácií zahŕňa identifikáciu polymorfného miesta, ktoré môžu byť použité ako molekulárne marker pre diskrimináciu ako mutantné a normálny alely. V prípade autozomálne recesívne ochorenie rodičia budú heterozygotná pre tento polymorfizmus, a pacient - homozygot z jednej alely markeru. To heterozygozita pre molekulárnu polymorfizmy definuje informačný obsah určitej vysoko rizikové rodiny narodenie dieťaťa s genetickou chorobou. V závislosti na rozdelení markerových alel na homológnych chromozómov pacienta a jeho rodičia rodiny môže byť plne informatívne pre DNA diagnostiku čiastočne informatívne alebo neinformativní.

Je veľmi dôležité analyzovať rizikové rodiny je počet polymorfné miesta jedného génu, presne určiť, na nejaký konkrétny alely zdedené mutantního génu, a aby rodina plne informatívny pre budúce PD.

bod Výhodou nepriamej metódy - možnosť diagnostiky DNA bez presnej identifikácie mutácií v géne, a to aj v neprítomnosti presných údajov o identifikácii a klonovanie mutovaného génu. Jeho významnou nevýhodou je nemožnosť diagnózy v neprítomnosti chorého dieťaťa (nedá presne určiť, ktorá polymorfná alely spojené mutantný gén), k chybe v diagnostike kvôli možnosti prejsť počas meiózy a nesúci polymorfné miesto na zdravom alely.

Presnosť molekulárnej diagnostika, možné zdroje chýb

pri vykonávaní prenatálnej diagnóza molekulárnych metód Je dôležité mať na pamäti, že dva hlavné zdroje chýb:
- kontaminácii vzorky fetálnej materskej bunky;
- možnosť prechodu nad pri nepriamou metódou.

Vzhľadom na veľmi vysoký citlivosť metódy PCR, je dôležité, aby sa zabránilo kontaminácii vzoriek fetálnych tkanív materskej bunky. Čistota vzorky na analýzu môže bp dosiahnuť iba starostlivým výberom placentárnu choriových klkov alebo pod binokulárne lupou, následným premytím fyziologickým roztokom. Je obzvlášť dôležité, aby sa zabránilo materskej krvi kontakt v prípade plodu odberu pupočníkovej krvi od Kordocentéza. Vysoká kvalifikácia lekára operátorom a používania kvalitatívnych reakciách určiť krvný nečistoty matky vyhnúť tejto komplikácii. Riziko takýchto diagnostických chýb môže výrazne varu umenshen pri práci za sterilných podmienok.

Spoľahlivosť molekulárnej diagnostika metódou priameho, tj. identifikáciou mutácií v géne je veľmi vysoká a blíži absolútna. Avšak vzhľadom na celý rad možných zmien v genóme počas zrenia pohlavných buniek (Crossing Over), a v skorých štádiách embryogenézy (mutagénneho účinku) je presnejší diagnostický index asi 99,9%. Značne ťažké vyhodnotiť výsledky molekulárnej diagnostiku nepriamej metódy. V prípade registrácie intragenní polymorfizmov presnosť nepriamy diagnóza je pomerne vysoká, pretože veličiny vnutritennogo prechodu zvyčajne nie viac ako 0,1% pre väčšinu známych génov.

Výnimkou môže byť iba relatívne veľké gény, ako je napríklad génu pre dystrofín, hemofília A, neurofibromatóza, a ďalšie. Tak v prípade, že pre dystrofín miery chybnej diagnóze môže byť až 2%, čo zodpovedá vysokej medznej frekvencie vnutritennogo (asi 2%) v tejto Giant génu (2200000 bp). Je tiež dôležité vziať do úvahy stupeň príbuzných a nositeľmi tohto pacienta, ktorý trávi AP. Množstvo možného zvýšenia chyby v prípade, že značka alela nie je určená v súrodenci ovocia, zatiaľ čo jeho ďalšie príbuzné. Predovšetkým by mali byť starostlivo posúdiť výsledky nepriame diagnóze s použitím vnegennyh polymorfné lokusy. Predpokladá sa, že s istotou stráviť AP v týchto prípadoch môže byť iba súčasné skúšanie niekoľkých polymorfných miest obklopujúcich mutovaný gén. Obvykle sa používa pre molekulárne diagnostické markery, frekvencia rekombinácie, ktoré mutantný alely je menšia ako desatín alebo stotín percenta. DNA polymorfizmy charakteristické sekvencie primérov pre PCR, nepriame metódy chybových hodnôt pre rôzne ochorenie diagnostikované prenatálne sú zhrnuté v hodnotení a monografiách.