Základné princípy cytogenetického prenatálnej diagnostiky.

V súčasnej dobe, problémové cytogenetická diagnostika v ktorejkoľvek fáze tehotenstva je prakticky vyriešená. Vyvinul spoľahlivé a účinné metódy analýzy chromozómov fetálnych buniek a embryonálnych membrán. V závislosti na dĺžke tehotenstva a cieľov študijný materiál pre analýzu chromozómov môže slúžiť bunky AF, chorion, placentárnu a fetálnej pupočníkovej krvi lymfocyty, získané nejakým spôsobom invazívnych. V našich najčastejšie používaných centrum chorion buniek (I termín), alebo placentárnu bunky (II) získa trimester transabdominálne prostredníctvom horionbiopsii alebo platsentotsenteza. Chromozomálne prípravky z placenty alebo choriové tkaniva sa pripravia priamymi alebo nepriamymi metódami predtým popísané podrobne v metodických odporúčaní a príslušné vedenie.

Výhody a nevýhody cytogenetickou analýzou pri použití rôznych metód získavania chromozómové preparáty z fetálnych vzoriek materiálu sú uvedené v tabuľke.

Použiť vo väčšine centier komplex cytogenetická a molekulárne cytogenetické diagnostické metódy poskytuje najúplnejšie informácie o fetálneho karyotypu v rôznych fázach vývoja plodu.

Video: Cytogenetické štúdie. Biopsia choriových klkov nevydareného potratu

Keď prenatálnej karyotyping To by sa malo riadiť zásadami analýzy chromozómov liekov medzinárodne uznávaných klinickej cytogenetiky a schválených Ministerstvom zdravotníctva, ako aj pravidlá medzinárodného názvoslovie popisujúce carnotite.

Predstavuje analýzu cytogenetickú buniek rôzne fetálneho pôvodu plodovej vody bunky Bunky AF sú reprezentované niekoľkých typov rôzneho pôvodu:
- bunky amniotickej membrány (vlastne amniocytů)
- fetálny epitelové bunky (epidermis, gastrointestinálne, urogenitálny a dýchacích ciest, dutiny ústnej sliznice).

Video: Parent Club (25.11.2015 - Part 1)

Kvalitatívne a kvantitatívne zloženie Bunky AF, a koncentrácia životaschopných buniek majú variabilitu a závisí na stupni vývoja. Optimálne pre cytogenetické výskumu je amniotickej epitel - aktívne proliferujúce bunkový klon špecifický pre dané kultúry. Medzitým presná identifikácia typov buniek, ktoré sú schopné mitotické delenie a klonoobrazovaniyu za in vitro bunkovej kultúre, veľmi ťažké.

Najčastejšie sa pre pestovanie použité amniotickej bunky získané v období 15-18 týždňov tehotenstva. Použitie pre tento účel amniocyty skôr (12-14 týždňov tehotenstva) alebo vyšší (po 20 týždňoch tehotenstva) podmienok je v zásade možné, ale spravidla veľmi komplikuje a predlžuje diagnostického procesu, zvyšuje počet neúspešných pokusov.

Štandardné kultiváciu buniek AF zahŕňa nasledujúce kroky: Nastavenie kultúry, subkultúra, hypotonické ošetrenie a fixáciu. Cez široko rozšírené použitie bunkových kultúr AF na svete, bežný spôsob prípravy chromozomálnych sú neexistujúce. Pre kultiváciu buniek AF použiť dva hlavné prístupy, ktoré sa líšia spôsobom výroby kolónie a metódy fixácie.

Video: nová generácia sekvenovania: princípy, možnosti a vyhliadky - Maria Logacheva

1. Banka-metóda-bunková kultúra Pacienti v zavesenie a upevnenie jednovrstvovej kultúre po trypsinizací. Test sa vykonáva v dvoch z troch kultúr (10 metafáz na vzorku). Ak sú všetky metafázové doštičky pozorovaný rovnaký karyotyp, je diagnóza stanovená. V prípade jedného metafáze s aberantne karyotyp (štrukturálne alebo číselné) bol analyzovaný záložný tretí kultúry. Ak je jeden a rovnaký chromozomálne aberácie určených viac ako jeden metafáze z jednej fľaše, ale nie je potvrdený v ostatných fľašiach diagnóza "psevdomozaitsizm". V prípade rovnakých chromozomálnych abnormalít vo viac ako jednej fľaše, diagnóza je nastavené "true mosaicismus".

2. Spôsob in situ - kultivácia a fixácia buniek na sklíčka v Petriho miskách alebo špeciálnych fliaš - šmykľavky. Analýza bola vykonaná na metafázových dosky troch kultivačných misiek (celkom 10 kolónií analyzované). Pri zistení abnormálne klon analyzovaný vsekultury. Chromozomálne aberácie pozorované v jedinom šálke, označuje "psevdomozaitsizme", viac ako jeden - "pravdivý mozaigshzme".

Proces štandardné kultivácia amniocyty od obdržania vzorky až karyotypizácie trvá v priemere 14-21 dní. Nevýhodou sú vysoké náklady na médiu a zariadení, čo je dôležité pre domáce laboratóriá, rovnako ako vysoká (až 2%), pravdepodobnosť kontaminácie vzorky materských buniek.

V posledných rokoch sa vyvinul nový prístup k analýza chromozómu z kultivovaných buniek. «Pipett» Táto metóda je založená na izoláciu mikromanipulyatsionnoy metafaznyhiprometafaznyhkletokiz nesuspenzionnyh úrode ihmorfologicheskim rysy a slabnúci vzhľadom k podkladu. Ďalej hypotonické ošetrenie a fixácie sú vykonávané na jednotlivé bunky. Tento spôsob skracuje obdobie kultúry na neskolkihdney a, čo je najdôležitejšie, zníženie rizika diagnostických chýb spôsobených ako mozaikou, a kontaminácii vzorky. Príprava prometafázi a metafázové doštičky týmto spôsobom môže byť akéhokoľvek primárneho a transplantovaných plodín. Bohužiaľ, drahé vybavenie a práce zabrániť širokej prijatia tejto progresívne metódy v klinickej praxi.