MRNA sa podieľa na syntéze protilátky. Metódy štúdia mRNA

V súčasnej dobe, dva prístupy - chemické a imunochemickej. Prvý z nich je založená chemická frakcionácie mRNA izolovanej z buniek, produkujúcich imunoglobulíny. Hlavné kroky sú: výber mislomnyh bunkových alebo mikrozomálnych membránovo viazaných polyribosomes (Stavnezer EA, 1971- Milstein a e 1972 ....) - extrakciu RNA z nich za podmienok, ktoré im bránia degradatsiyu- gradientu hustoty RNA frakcionácie saharozy- výber frakcie zodpovedajúcej veľkosti čistenie zamýšľané mRNA podľa stĺpca ribozomálnej RNA s oligo ((1T) - alebo poly (u), celulózy (alebo Sepharose), len bohatý oneskorenie adennlovymi bázy mRNA (poly mRPK), a štúdium biologických aktivita vyhradený ip akcie.

V niektorých prípadoch sa ďalšie čistenie mRNA prípravky Použité polnakrplamidnom gélová elektroforéza v prítomnosti 99% formamidu (Faraci e. A., 1976- Matthyssens s. A., 1976). U týchto alebo iných variant vyššie popísaného schémy, ktoré sa používajú u prevažnej väčšiny vedcov. Výťažok individuálne poly mRNA je typicky 0,01% z množstva RNA zavedeného (Brownlee napr. A., 1973). Výsledkom je, že v súčasnej dobe pridelená NZ plasmacytomy MOPC 70E, MOPC 21, MOPC 41 niekoľko mRNA kódujúce ako H a L reťazca. Čistota väčšiny týchto liečiv nie je vyššia ako 40-60%.

Iba jedna skupina autori v poslednej dobe sa podarilo spôsobom na získanie mRNA o viac ako 90% čistotou (Matthyssens e. a., 1976). To nie je prekvapivé. Použitá metóda je založená jednak na separáciu molekúl RNA podľa ich molekulovej hmotnosti a za druhé, na oddelenie populácie napojená obsahujúcich RNA zbavený z neho.

Samozrejme, že môžu bunky predstavuje počet mRNA s podobnými vlastnosťami, ktoré nie sú spojené s imunoglobulíny. Všetky tieto nevyhnutne kontaminovať RNA prípravky jednotlivých imunoglobulínu RNA. Je zrejmé, že by bolo buď väčšie alebo menšie, v závislosti od relatívnej podiel imunoglobulínu syntetizovanej bunkami týchto nečistôt.

Preto je pre izolácie mRNA myelómu, syntézu protilátok, v ktorej 30-40% syntézy všetkých proteínov všeobecne, môže byť táto metóda ispolzovan- súčasne k izolácii mRNA kódujúce syntézu imunoglobulínu z normálnych lymfatických tkanív, najmä z vysoko heterogénne zloženie buniek na slezine to je jasne nevhodné.

e-mail perspektíva, Z nášho pohľadu sa jedná o imunochemickej prístup k riešeniu tohto problému. Jej výhoda spočíva v tom, že už v prvom kroku frakcionácie zahŕňa prísne špecifický výber jednotlivých polyribosomes s použitím protilátok proti proteínu syntetizovanej týmito polyribosomes. Existujú tri varianty tejto metódy. Pôvod - depozície polyribosomes protilátky k proteínu syntetizovanej v prítomnosti nosiča, teda rovnakého proteínu (koprecipitační) .... (Delovitch a e, 1972- Laškov, Mitelman, 1975).

Po druhé - spracovanie polyribosomes protilátky proti proteínu syntetizovanej nimi a vyzrážaním výsledný komplex antisérum protilátok (nepriamy precipitácie) (Schechtcr, 1973, 1974). A tretia - extrakčný jednotlivé polyribosomes cez immunosorbents obsahujúce kovalentne alebo nekovalentne spojený protilátka syntetizované na polyribosomes proteínu (Sidorov a kol, 1973- Sidorova s, 1974- Ľubimová et al, 1975, ...) .. Z takto získanej jednotlivé polyribosomes tak či onak polysomal RNA bola extrahovaná a mRNA odstráni priechodom zmesi cez kolónu s oligo- alebo poly (U) celulózy. Použitie imunochemická prístupu podarilo získať mRNA preparáty približne 95% čistotu.