Hybridizácia mRNA a DNA protilátok. Lokalizácia v- a gény v genóme imunoglobulínov

Pri pokusoch na hybridizácia rôzne mRNA a DNA, obzvlášť čoskoro zvyčajne získava dvojfázovú krivku s prechodovou oblasťou v jednom regióne a druhá nízka - vo vysokých hodnotách Cot4l.

Použitie pre útlaku hybridizácia neznačeného mRNA, kódujúci L-reťazec homológnej alebo heterológnej C-oblastí už umožnené zistiť, že vysoké hodnoty v dôsledku hybridizácia Cotih C génu, a že počet týchto génov nepresahuje dve - štyri na haploidné genóm. Prítomnosť poľa s nízkymi hodnotami coth výskumníkmi časť považovať za dôkaz významného počtu "zárodočných» V-génov. Avšak zvýšenie čistoty mRNA prípravkov a použitia mRNA fragmentov, obsahujúci a poly sekvencie ukázala, že V-gény sú tiež jedinečný, a ktoré sú uvedené v genóme v množstve najviac dve alebo tri kópie v posledných rokoch.

Zoberme si príklad dát Hybridizačný experimenty na mRNA, kódujúce syntézu lambda-L-reťazca myšieho myelómu MOPC 104E s DNA z pečene myshn (Matthyssens e. a., 1976). Na základe údajov o primárnej štruktúry V-oblastí všetkých v súčasnosti skúmané myšou reťazca lambda (18 vzoriek), rozdelených do siedmich podskupín. Ak sa pre každú V oblasť je špeciálny V-génu, musí byť detekovaný 7-gény v myšiam genómu. V skutočnosti ich počet nemôže byť menšia ako 145 (za týchto podmienok, je pravdepodobnosť detekcia sedem rôznych podskupín v štúdii celkovo 18 vzoriek sa zvýši na 90% - pri 50% pravdepodobnosti počtu V-génu, musí byť minimálne 25). hybridizácia bola stanovená z krivky, že V-gén pre L-reťazca MOPC 104E sa opakuje do genómu nie viac ako 2 až 3 krát. V rovnakej dobe, stupeň homológie dvoch mRNA kódujúce syntézu dvoch reťazcov lambda, dokonca patrí do dvoch odlišných podskupín (MOPC 104E a NOR 2020), veľmi veľké. Extrapolácie tieto údaje ku zvyšku mRNA kódujúce reťazce lambda, možno dospieť k záveru, že u tejto podobnosti medzi V-domény týchto reťazí L-mRNA MOPC 104E by mať gnbridizovatsya so všetkými z nich, a preto hodnoty Cot by musel byť podstatne nižšia, než je definované v experiment (čím viac opakovaní, tým nižšia je hodnota Cot ,,,). Tieto údaje naznačujú, teda proti prítomnosti v genóme veľkého počtu V-gény, a teda v prospech somatickou mutáciou ako primárny faktor, poskytovanie rôznych protilátok (imunoglobulínov).

Malo by však byť poznamenané, že spôsob hybridizácia To je pomerne zložitá a zdá sa, že nedovolí, aby presne interpretovať výsledky. Tak na rozdiel od pokusov opísaných vyššie, za použitia cDNA do V- a C-domény v samostatne (cDNA a kDPKs) bolo zistené, Hybridizácia kDNKu vysokú špecificitu k mRNA (Smith, 1977- Stavnezer, Bishop, 1977). Bolo zistené, že zatiaľ čo kDNKs rovnako hybridizuje so všetkými mRNA kódujúci typ kappa L-reťazca kDNKu reaguje iba s kappa homológnej mRNA. To znamená, že počet V-génov je určená hybridizáciou môže byť podceňovaná.

V rovnakej dobe, pričom tento spôsob hybridizácia Ukázalo sa, že veľmi užitočná pre štúdium lokalizácie V- a C-génov bunkového genómu. V poslednej dobe, táto metóda bola schopná preukázať somatické reorganizácii génov kódujúcich V- a C-oblasť imunoglobulínu. Ukázalo sa, že v embryonálnom myšiam genóme V- a C-gsny oddelí, zatiaľ čo v nádoru (plazmové niť MOPC 321, NOR 2020), ktoré sa nachádzajú v blízkosti (fúzovania).

krivky mRNA hybridizující s DNA, odvodený od pečeňových buniek a myelómu, boli takmer totožné. To znamená, že v bunkách produkujúcich imunoglobulíny, neexistuje žiadna amplifikácie génov, ktoré ich kódujú.

Preto v súčasnej dobe nájdených, genóm, ktorý má 2 alebo 3 z génu kódujúceho V oblasť lambda reťazcov, 2 alebo 3 génu pre V-oblasti reťazca kappa, a 2-4 génu kódujúceho C oblasť L-reťazca.

Po prvé, je tu Zlúčenina V-a C-gény, potom tento kus DNA a 200-450 nepreložené nukleotidy transkribovaných do mRNA, ktorá po spojení s koncom 200 3`-poly nukleotidu transportovaný do cytoplazmy, a je obsiahnutý v polyribosomes, ktorý kóduje syntézu prekurzorov polypeptidových reťazcov imunoglobulínov.

Po odštiepení prekurzora ekstrapeptidov (A možno pred) začne montáž imunoglobulínových molekúl, ich prenos do mikrozomálnych vačkov a buď sekréciu, alebo inkorporácia do bunkovej membrány.