Gény syntézu protilátky. Počet génov, ktoré sa zúčastňujú syntézy imunoglobulínov

primárny výskum Štruktúra a genetika imunoglobulínov To viedlo k záveru, že každý nolipeptidnaya reťazec je kódovaný aspoň dva gény: V-génu zodpovedného za variabilné oblasť a C-Gepa zodpovedné za konštantných oblastí molekúl. Počet oboch génov v genóme buniek je zásadný záujmu. Skutočnosť, že pozorovaný diverzita protilátok rôznych autorov vysvetlené buď v podmienkach "zárodočnej" teórie génov, podľa ktorej sa v genóme sady génov pre všetkých známych V-domény, tj. E. mnoho tisíc V-génu, a to buď z hľadiska somatické teórie mutácie pričom sada v-gény v genóme obmedzený, a paleta štruktúr imunoglobulíny (protilátky), sa vyskytuje ako výsledok somatické mutácie. K dispozícii je tiež kompromis hľadisko. Všetky tieto myšlienky vyčerpávajúcom diskutovaných, aby sa stal vodcom a spoluautormi (Leder e. A., 1974), takže čím viac detail nebudeme zastaviť.

Všimnite si, že AE Gurvitch a R. S. Nezlin (1965) bola vykonaná pôvodný predpoklad že jednotlivé úseky genómu kódujú protilátky a aktívnych centier a že L-II- a TY "zhromaždiť" menších, nezávisle syntetizované reťazca. Je veľmi zaujímavé, že po piatich rokoch, tieto myšlienky znovu objavila v podobe hypotézy "vykonávanie» ( «vloženie») informácie kódované polynukleotidy podľa malého (asi 30 až 45 nukleotidov), zabezpečenie dostupnosti CDR v H a L reťazcov (Wu, kabát, 1970).

záverečný Odpoveď na tieto otázky, Je zrejmé, že môže poskytovať iba priame stanovenie V- a C-gény v genóme. Izolácia mRNA prípravkov s vysokým stupňom čistoty zodpovedajúcich povolená počiatočné experimenty. Prístup vyvinutý mnoho rokov, je určenie počtu génov RNA-DNA hybridizácie. Vzhľadom k tomu, štruktúra mRNA transkribovaných štruktúru úplne komplementárne DNA časť, potom môže byť táto metóda určenie počtu génov, a na zistenie, či ich zosilnenie dochádza (množenie) pre indukciu syntézy imunoglobulínov.

V súčasnej dobe je výskum Tento druh sa vykonávajú s mRNA, kódujúce syntézu L-reťazce sú dostatočne čisté prípravky N-mRNA sa ešte získa. Nevyhnutnou podmienkou pre vykonávanie týchto pokusov je, po prvé, čistota prípravu mRNA a vysokej špecifickej aktivity, a za druhé, prítomnosť veľkého prebytku DNA. Získať vysokomechenye mRNA drog je ťažké. Typicky je to vykonané za použitia mRNA izolované NT buniek kultivovaných v prítomnosti vysokých dávkach alebo 32P-3H predshsstvennikov alebo viac - mRNA značených 125I in vitro (Faraci ea, 1976- Matthyssens e a, 1976 ....). K dispozícii je tiež nepriama verzia metódy. To spočíva v tom, že najprv pomocou reverznej transkriptázy na mRNA pripravenej matrice vysokomechenuyu komplementárne DNA (cDNA), a to je už použitý pre hybridizáciu na bunkovej DNA (Schechter napr. A., 1976- Storbo napr. A., 1976).

Purifikovaný mRNA alebo cDNA hybridizovány denaturovaných určitých podmienok (pôsobenie ultrazvuku) alebo DNA z pečene myšieho myelómu NS buniek a percento viazané RNA (alebo cDNA), ako funkcia času hybridizácie. (Stanovenie je založené na stabilitu hybridov RNase efektu.) Za týchto podmienok bolo percento hybridizované RNA (cDNA) (f) je závislá na koncentrácii RNA (cDNA) (RO), koncentrácia DNA (C) a dobu inkubácie (f). S veľmi veľký prebytok DNA nezávisí na f R0, a závisí len na C "a t (Cot). Lôžku množstvo, pri ktorom hybridizácia je 50%, samozrejme závisí na stupni komplementarity DNA a mRNA (cDNA).

stupeň homológie dvoch mRNA (A teda aj ich V- alebo S-gén) sa stanoví v kompetitívna inhibičné experimenty hybridizácie značeného prípravu mRNA neznačeného liekov homológnej a heterológnej mRNA, alebo izoláciou DNA z vytvoreného hybridu, a jeho hybridizácia s inými značeným homológnej a heterológnej mRNA. Porovnanie týchto výsledkov s údajmi o primárnej štruktúry týchto polypeptidov, ktoré sú kódované mRNA skúmaná, je možné vidieť, či je krivka definovaná frekvencia opakovania hybridizácie génov s odhadom z údajov o homológie V- a C-domény.