Preklad mRNA. Vlastnosti translácia mRNA syntetizované protilátky

biologická aktivita mRNA izolované prípravky hodnotené na svoju schopnosť syntetizovať za polypeptidových reťazcov buniek súvisiacich. Definovanie syntetický peptid konkrétnu hodnotu, pokiaľ ide o všetky novo syntetizované, ale tiež môže stanovenie čistoty prípravku mRNA. Predpokladom je v tomto prípade je použitie proteínu značkovanie nie je žiadne jednotlivé aminokyseliny, ale zmesi aspoň 10 aminokyselín a rádioaktívny chemikálie analytické metódy s vysokým rozlíšením (napr., Dvojrozmerný peptidové mapovanie).

Pre transláciu mRNA Bezbuněčné systémy používajú tri druhy Krebs ascites hepatómy (Swan ea, 1972- Schechter, 1973 ..). králičích retikulocytov (Stavnezer, Huang, 1971- Mach e. ​​a., 1973- Cowan e. a., 1976) a pšenica sadenice (Schechter, Burstein, 1976- Storbo, Marvin, 1976). Najpohodlnejšie, zdá sa, že je posledný systém. Výťažok značeného prekurzora v ňom je 0,1 pmol alebo 2,6 ng do 0,007 jednotiek zavedených A2vo mRNA (Schechter, Burstein, 1976).

Vzhľadom k tomu, že v tejto fáze výzvu popísané Výskum je študovať potenciálna translačný schopnosť mRNA a bezbuněčný systém, rastlín a zvierat v zásade správajú v tomto ohľade rovnaké (Schechter, Burstein, 1976), stupeň vhodnosti a výhody systému samozrejme závisí na nasledujúcich troch parametrov: veľkosť endogénneho proteínu syntéza (čím nižšia, tým lepšie), dostupnosť a jednoduchosť požadovaných zložiek a množstva mRNA, ktorá musí byť v systéme na získanie spoľahlivé skúmané fúzny proteín.

Video: Broadcast proces pre plastickú výmenu

analóg bezbuněčný systém niekedy slúži ako žabích vajíčok. Bolo preukázané (Smith napr. A., 1973), že zavedenie do oocytov v mRNA kódujúce imunoglobulínových reťazcov., Vedie k syntéze týchto reťazí. Táto metóda je však zložitejšia a vyžaduje značné množstvo mRNA.

Video: Prednáška 3. transkripcie, translácie

väčšina experimentov nesená vysielania s mRNA, ktoré kódujú syntézu L-reťazec (L-mRNA), pretože ich separácia je oveľa jednoduchšie, než izolácia mRNA kódujúce syntézu H-reťazca (H-mRNA). Získané translačný produkty mRNA kódujúce myelómu imunoglobulíny L-reťazca viedla k neočakávanému výsledku. Bolo zistené, že mRNA v bezbuněčných systémoch kódovania syntézu polypeptidov (prekurzor) väčšej veľkosti, než je zrelý L-reťazec. Vytvorenie prvého ťažkého produktu pod pôsobením 13S mRNA plasmacytomy MOPC 41 buniek popísaných Swann et al (Swan e a 1972)., Pôsobením 10-14S mRNA z buniek plasmacytomy MOPC 21 -. Milstein et al (Milstein a f ,. 1972). Molekulová hmotnosť výsledného produktu bola väčšia ako molekulová hmotnosť príslušných L-reťazca (1500), z ktorých sa dospelo k záveru, že obsahuje 15 ďalšie aminokyselinové zvyšky.

ako pri pridaní do bezbuněčném systému 355-formyl-tRNA ako jediným zdrojom označí 355-metionylový zistený v ťažkej zložky, sa dospelo k záveru, že aspoň časť z týchto dodatočných aminokyselín umiestnených na NH2-koitse molekuly L-reťazec (u eukaryoty syntéza polypeptidových reťazcov začína začlenenie metionínu) , Neskôr syntéza údaje prekurzora bolo potvrdené v experimentoch s mRNA "kódujúce syntézu L-reťazca MOPC 70E (Toncgawa, Baldi, 1973), MPC" (Storbo, Marvin, 1976), MOPC 41 (Mach ea, 1973), MOPC 321 ( Schechter, Burstein, 1976), MOPC 63 (Schechter e. a., 1976) a L-reťazca MOPC 104E (Burstein e. a., 1976).