Metódy laboratórnej diagnostiky. imunologické metódy

Video: CMD - Centrum molekulárnej diagnostiky

Imunologické metódy majú významnú diagnostickú a prognostickú hodnotu v mnohých reumatických ochorení.

Štúdia nešpecifická imunita zahŕňa skúmanie počet leukocytov a monocytov v krvnom sére, zložky komplementu, mobilita odhad, fagocytárnu a mikrobicídne aktivitu mononukleárnych fagocytového, produkciu prozápalových cytokínov (IL-ip, IL-6, TNF-alfa, a ďalšie.).

Tieto hladiny sa zvyšujú komplement je pozorovaná v akútnom zápale, infekčných procesov a zníženie - pod imunokomplexami ochorenia. Tak, zníženie koncentrácie C2-Cs, a zložky komplementu vo zrážacie reakcii s antisérom typickou pre SLE, RA, ankylozujúcej spondylitídy, vaskulitídy, ulcerózna kolitídy. To je vzhľadom k aktivácii komplementu v dôsledku tvorby imunitných komplexov. Určenie diagnosticky významné zložky komplementu v synoviálnej tekutine (obsah znižuje RA) v mozgovomiechovom moku (obsah klesá s lupus tsereb-rovaskulite) v biopsiách kože a obličky.

Stav bunková imunita je hodnotená kvantitatívne ukazovatele (absolútny a percento T-lymfocytov, aktívnych T-lymfocyty, T-helper typu I a T-cytotoxických lymfocytov) a funkčné testy.

Najčastejšie používaným:
&diams- reakcie leukocytov migrácie inhibícia (RTML) v prítomnosti antigénu a mitogény: RTML fytohemaglutinín (PHA), concanavalin A (Con A), alergény hemolytického streptokoka, Staphylococcus. Reakčná zmes sa na základe vlastnosti lymfocytov sa precitlivenosti na špecifické antigény za vzniku stabilizujúce lymfokíny migračná inhibičná leykotsitov- vyššiu funkčnú aktivitu lymfocytov, menšie postavy RTML;
&diams- lymfocytov transformácie výbuch reakcie (BTR), ktorý sa hodnotí za použitia funkčnú aktivitu T-lymfocytov. V reakcii na mitogény (PHA), Con A, a antilymfocytárnu sérum et al. Transformácia lymfocytov dochádza lymfoblastov (väčšie výbuchu bunky sa tvoria, tým vyššia je aktivita T-lymfocytov).
Subpopulácie T-lymfocytov stanovenej s monoklonálnymi protilátkami.

Pre vyhodnotenie funkčný stav humorálnej imunity pomocou kvantitatívne stanovenie imunoglobulínov v krvnej plazme. Imunoglobulínu (Ig), - sú proteíny majúce funkciu protilátky a rozdelené do piatich hlavných tried: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.

IgG prítomné v sére v najvyššej koncentrácii (6,39-13,49 g / l), predstavuje 80% aktivity protilátok. Rozlíšiť 4 podtriedy IgG: IgG2 (60-70%), IgG2 (20-30%), IgG3 (5-8%) a IgG4 (1-3%).

IgA je hlavná sekrečnú imunoglobulín nájdený v slinách, slzách, bronchiálnou a črevné sekréty a materským mliekom. Tajomstvo IgA dimér je forma obsahujúca J-reťazca, ďalší peptid, nazvaný sekrečnú komponenta. Koncentrácia IgA v štandarde je 0,7-3,12 g / l.

IgM sa skladá z 5 monomérnych podjednotiek spojených disulfidovými mostíkmi a J-reťazca, ktoré tvoria pentamer. koncentrácie v sére IgM obvykle činí 0,86-3,52 g / l.

IgD je v stopových množstvách v sére, ale jedná sa o základný typ imunoglobulínu prítomná na membráne B-lymfocytov. IgE zohráva dôležitú úlohu v reakciách okamžitej precitlivenosti.

Pre stanovenie koncentrácie hlavných tried imunoglobulínov (IgG, IgM, IgA), za použitia metódy podľa radiálne imunodifúzia alebo nefelometrické techniky, IgE - vysoko citlivé radioimunotest alebo enzýmové imunoanalýzy techniky.

Stanovenie koncentrácie imunoglobulínov sú použité pre diagnostiku primárne alebo sekundárne imunodeficiencie (v týchto prípadoch je zníženie koncentrácie hlavných tried imunoglobulínov), a monoklonálne immunoglobulinopaty (v kombinácii s Imunoelektroforéza sére a moču).

Najbežnejšou formou imunodeficitu je IgA immunodefi-op, ktorých vývoj je niekedy pozorovaná u reumatických ochorení, a môže tiež prebiehať proti pozadia niektorých liekov (D-penicilamín, sulfasalazín, kaptopril a ďalšie.). Zvyšujúca sa koncentrácia IgA často pozorované u séronegatívnych spondyloartropatie, hemoragická vaskulitída, Sjögrenov syndróm, psoriatickej artropatie.

Často sa pri zápalových reumatických ochorení je pozorovaný vývoj polyklonálne Hyper.
Reumatoidná faktor (RF) sú autoprotilátky na Fc-fragment IgG, aj keď môže byť spojené s IgM a IgA.

Možno, že blokovanie reumatoidnej faktor autológne IgG, čo vedie k zvýšeniu percenta skryté, RF komplexu (s predĺženou dobou trvania reumatoidnej artritídy s vistseritami).

K identifikácii RF triedy M platí:
&diams- latexová aglutinácia inertnými latexové častice potiahnuté ľudským Ig. Najvyššia riedenie séra dávania aglutinačný titer považované za reakcie. Titer 1:20 alebo vyšší sa považuje za pozitívny;
&diams- reakcie Vaaler Rosa s ovčími červenými krvinkami potiahnutých králičie anti-ovčej červené krvinky.

Najvyššia riedenie séra dávania aglutinácia diagnosticky významné, ak nie menšia ako 1:32.
Lupus (LE)-buniek. Prítomnosť LE-buniek v dôsledku prítomnosti v sére triedy IgG protilátok proti DNA-Histon komplexu, ktoré reagujú s jadrami sú uvoľňované z rôznych buniek, ako výsledok ničenia týchto buniek. LE-bunky sa nachádzajú v 60-70% pacientov s SLE. Sú zrelé neutrofily, pohlcujú nukleárna podstata zničených buniek. V cytoplazme neutrofilov nájdených veľké homogénne začlenenie (Hematoxylin krvinky).

V prípade neúplného fagocytózu neutrofily nahromadené okolo teľa hematoxylín v tvare objímky (ružica formácie jav). Výsledok detekovanie aspoň LE-5 buniek na 1000 bielych krviniek, sa považuje za pozitívne. Jednotkové čiastky LE-bunky sa nachádzajú u 10% pacientov s RA, chronickej aktívnej hepatitídy, alergie na liečivá, Nodózna nodosa, systémové sklerodermia, dermatomyozitída, zmiešané ochorenie spojivového tkaniva.

Antinukleárne protilátky (AHA) najčastejšie definovaná u reumatických chorôb a vyskytujú sa vo viac ako 90% pacientov SZST. Sú rodina autoprotilátok interagujúcich s ribonukleovej kyseliny a proteíny, jadro, cytoplazmatické antigény. AHA stanovené nepriamu imonufluoreskujúca, dvojité imunodifúznemu a kontrelektroforeza, ELISA a imunoblotu.

Pri použití nepriame imunofluorescenčné metódou v praxi existuje šesť typov farbív alebo luminiscencia, jadrá, ktoré sú dôležité pre diagnostiku systémových ochorení spojivového tkaniva:
&diams- homogénne zafarbenie v dôsledku prítomnosti protilátok proti dvouřetězcové DNA a histónov najtypickejšie SLE a lupus dávkovanie;
&diams- periférne škvŕn spôsobených cirkulujúcich protilátok na jadrové membrány (konkrétne pre SLE);
&diams- zrnitý farbenie dochádza najčastejšie, čo ukazuje na prítomnosť rôznych AHA, takže má najnižšiu špecifickosti (poznamenali v SLE, RA s viscerálnej prejavmi, zmiešané ochorenie spojivového tkaniva);
&diams- Nukleolární (nukleolární) luminiscencie v dôsledku protilátkovej zložky jadierka sa vyskytuje v systémovej sklerózy, ochorenia Shegrena- ANF občas nájsť v endokrinné ochorenia (poliendokrinopatiya, diabetes typu I mellitus, zápal štítnej žľazy, tyreotoxikóza), ochorenia kože (psoriasis, pemfigus), ako aj doterajší stav tehotenstva po transplantácii orgánov a tkanív (vo vývoji reakcia "štep verzus hostiteľ"), u pacientov na hemodialýze;
&diams- centromerickou luminiscencie je pozorovaná vo výskyte protilátok proti centromér chromozómov (charakteristické chronicity MIC);
&diams- cytoplazmatický svetlo indikuje prítomnosť protilátok proti tRNA syntetázy, najmä Jo-1 (spoločný v dermatológii a polymyozitídy).

Metódy rádioaktívnych a imunitného väzba, radiálne imunodifúzia, Imunoprecipitácia odhalil AHA na špecifické jadrové antigény.

Protilátky proti deoxyribonukleovej kyseliny (DNA). Protilátky proti natívnym (dvouřetězcová) DNA, najmä tých, ktoré sa detekujú radioimunotestem testov (metóda Pharr), relatívne špecifická pre SLE. Ich definícia je zásadný pre posúdenie aktivity ochorenia, predpovedať vývoj exacerbácií a účinnosť liečby. Protilátky proti denaturovaného (jedno-) DNA menej špecifické pre SLE a iných reumatických chorôb často zistené.

Protilátky k histónov. Históny - základná súčasť, skladajúci sa z troch podjednotiek: dva diméry H2A, H2B, že po stranách je NS-H4 polysulfidu amónneho, tetrameru a spojený s tretím podjednotka sa skladá z dvoch závitov molekuly DNA.

Protilátky proti histónov H2A-H2B sa nachádzajú takmer vo všetkých pacientov s liek lupus syndrómom (indukovaná novokainamidom), u pacientov liečených prokaínamid, ale nemajú príznaky lupus, rovnako ako v 20% pacientov s SLE.

Protilátky k ribonucleoprotein (RNP). Protilátky proti ribonukleoproteinového obsahujúce anti-Sm, anti-snRNP (U1RNP), anti-Ro / SS-A, anti-La / SS-B, nájsť v SLE celkovo viac ako protilátky proti dvouřetězcové DNA. koncentrácia v krvi týchto protilátok je veľmi vysoká. Nachádza sa v zmiešaným ochorením spojivových tkanív, aspoň - u pacientov s SLE, ktorý vedie klinickú manifestáciu kožných lézií, subakútna SSD a iných autoimunitných reumatických ochorení.

Protilátky proti Sm (Smith) -antigenu. Protilátky proti Sm-antigén sa nachádza iba v SLE. Použitie imunofluorescenčný metódou sú uvedené v 30% prípadov a 20% - podľa metódy hemaglutinácia. Protilátky proti Sm-antigén nie je detekovaná v iných reumatických ochorení, takže sú považované za markery SLE protilátok a ich detekcie je jedným z diagnostických kritérií pre ochorenie. V prítomnosti SM-protilátok je pozorované u malígneho ochorenia, centrálneho nervového systému, lupus psychózy a relatívnej zachovanie funkcie obličiek. Avšak hladina protilátok proti Sm-antigénu nekoreluje s aktivitou a klinické subtypy SLE.

Protilátky proti Ro (Robert) / SS-A sú namierené proti jadrovým ribonukleoproteinů, ktoré sú spojené s Yl-Y5 cytoplazmatickej RNA transkribovaných RNA polymerázou III. V závislosti na citlivosti použitých metód pre štúdium protilátok Ro / SS-A sú uvedené v 60-78% pacientov s Sjögrenovho syndrómu, v 96% pacientov s Sjögrenov choroby a 35-57% pacientov s SLE.

V SLE súvisiace produkcie protilátok dát so špecifickým súborom laboratórnych a klinických prejavov ochorenia: fotosenzitivita, Sjögrenov syndróm, poškodenie pľúc, lymfopénia a trombocytopénia hyperproduction RF. Zvýšenie koncentrácie protilátok proti Ro / SS-A v kombinácii s hyper IgM RF je často pozorovaný v ANF-negatívne podtypu ochorenia (v 2-5% pacientov s SLE) - tzv subakútnou kožný lupus.

Protilátky proti La (Lane) / SS-B namierenej proti proteínu spojeného s transkripty RNA polymerázy III. Protilátky proti La / SS-B vo väčšine prípadov sa vyskytuje v spojení s protilátkami proti Ro / SS-A, zatiaľ čo druhý môže dôjsť v izolácii. Protilátky proti La / SS-B sa nachádzajú v chorobe a Sjögrenov syndróm, v kombinácii s RA a SLE (ale nie systémové sklerodermia), a primárna biliárna cirhóza. V SLE protilátky proti SS-B / La-antigén je viac pravdepodobné, že dochádza v skorých štádiách ochorenia, ktoré sa vyvíja v starobe, a je spojené s nižším výskytom vývoja nefritída.

SCL-70 protilátky sú zvyčajne detekované v difúzne formou systémovej sklerózy. V prítomnosti ochorenia SCL-70 protilátky v kombinácii s génmi vozík HLA-DR3 / DRw52 17-násobné zvýšenie rizika vzniku pľúcnu fibrózu. Detekcia SCL-70 protilátok u pacientov s izolovanou Raynaudovým syndrómom ukazuje vysokú pravdepodobnosť vzniku systémovej sklerodermie.

Antitsentromernye protilátky (ASA) zistené 20% pacientov so systémovou sklerózou (väčšina z nich existujú dôkazy o CREST syndrómu), aspoň - v primárnej biliárnej cirhózy (polovica z týchto pacientov sú známky sklerodermia), a veľmi zriedka - v chronickej aktívnej hepatitídy a primárne pľúcnej hypertenzie. Protilátky proti centromér považovaná za pozitívnu prognostický indikátor vývoja systémovej sklerózy u pacientov s Raynaudovým syndrómom.

Protilátky proti aminoatsilsintetaze tRNA (antisintetaznye protilátky) sú detekované v prítomnosti pacientov s polymyozitídy ILD. Všeobecne sú detekované syntetázy protilátky u 40% pacientov s polymyozitída, 54% pacientov s idiopatickou dermatomyositidou v prípade foriem týchto ochorení a iba 6% pacientov s polymyozitídy, jeden z ďalších prejavov počas nádoru DBST- myozitída nie sú zistené tieto protilátky. Produkty antisintetaznyh protilátky je spojená s vývojom takzvaný "antisintetaznogo syndrómu".

Antifilaggrinovye protilátky (APL) sú rodina, ktorá zahŕňa antikeratinovye protilátky antiperinuklearny faktor protilátky Sa-antigénu a protilátky pre nedávno popísaný cyklický peptid citrulínu s obsahom. Podľa modernej koncepcie, hlavné antigénne determinanty rozpoznaný týchto protilátok je citrulinovaných peptidov, ktoré, najmä prítomný v synovii pacientov s reumatoidnou artritídou (RA). AFA sú vysoko špecifické pre RA. Najpoužívanejšie sú AFA v diagnóze skorej RA. Niekoľko štúdií preukázalo, agresívnejší priebeh RA v prítomnosti týchto protilátok u pacientov.

Protilátky proti fosfolipidov (APL) - heterogénne skupina autoprotilátok, ktoré reagujú s negatívne nabitou (fosfatidylserín, fosfatidylinozitol, kardiolipin) a neutrálne (fosfatidyletanolamínu, fosfatidylcholín) fosfolipidy. Tie zahŕňajú lupus antikoagulans, protilátky proti kardiolipinu a faktory, ktoré určujú vývoj falošné pozitivity Wasserman.

Lupus antikoagulant (LA) - imunoglobulíny triedy IgG a / alebo IgM, inhibujú in vitro jeden alebo viac fosfolipidzavisimyh koagulačné reakcie, BA je považovaná za reprezentatívnu rodiny protilátok proti fosfolipidov, ich syntéza je spojená s rozvojom arteriálnej alebo žilovej trombózy.

Antikardiolipinové protilátky (ACL). Pre určenie CLA použitej metódy Immunoassay. CLA produkty (najmä pri vysokých titrov IgG ACL), rovnako ako tvorba BA, je spojený s rozvojom antifosfolipidového syndrómu.

Falošne pozitívne Wassermann reakcia je rýchla sérologické diagnostika syfilis pomocou metódy založenej na štandardnom suspenzie flokulačného fosfolipidu (kardiolipin) pacientovho séra, obsahujúce anti-protilátky proti treponemám (reagin). Pre presnejšiu diagnostiku syfilisu fluorescenčnou metódou treponemálními antigén.

V 15-20% pacientov s SLE je detekovaný falošne pozitívne Wassermann reakciu, a 30% zdravých jedincov s falošne pozitívne Wassermann reakcie v následnom vyvíjajúce SLE. Veľmi často falošne pozitívne Wasserman zistená u pacientov s antifosfolipidovým syndrómom.

Antineutrophil tsitoplazmatineskie protilátky (ANCA). ANCA sú rodina autoprotilátok namierených proti špecifickým antigénom prítomným v cytoplazme neutrofilov. K dispozícii sú dva typy ANCA, ktoré určovali nepriamou fluorescenčnou metódou za použitia pevných neutrofilov absolútnu darcov alkohol. Protilátky spôsobiť difúzna proteinázy III (klasické) a cytoplazmatickej žiaru označovaný ako K-ANCA alebo p-ANCA. Protilátky proti myeloperoxidáze, elastázy a laktoferín sa vyznačujú perinukleární typu emisií a označený ako perinukleární alebo p-ANCA. ANCA sú často detekované v systémovej vaskulitídy.

Streptokoková infekcia antistreptococcal spôsobuje zvýšenie titrov protilátok. Stanovenie antistreptococcal protilátky sú použité pre diagnózu akútnej reumatickej horúčky (akútna reumatická horúčka) a akútne glomerulonefritídy.

Najrozšírenejšie stanovenie protilátok proti streptolyzín O (ASL-O), streptokináza (ACK) a streptodezoksiribonukleaze (anti-DNázy B). Zvýšenie titrov SLA-O sa vyskytuje vo viac ako 2/3 chorých s akútnou reumatickej horúčky, a iba u polovice pacientov s akútnou glomerulonefritídou. Maximálna titre antistreptococcal protilátky identifikovanej v priebehu vývoja artritídy a pri vývoji Carditis a chorea titre týchto protilátok sú významne znížené, čo znižuje diagnostickú hodnotu tohto testu.

Dôležité pre diagnózu sú detekčné reakcie protilátok po infekcii: Wassermann komplement fixačný reakcia s tuberkulózou, pseudotuberculosis, Yersinia, šigelóza a ďalšie antigény, HBs-antigénov, gonokokovej (Bordet-Gengo reakcie) a brucelóza (reakčná Wright-Heddlsona) antigény titrov anti-Chlamydia protilátok.

Kryoglobuliny - skupina sérových proteínov s abnormálne schopnosťou reverzibilné vyzrážaním alebo tvorbou gélu pri nízkej teplote. Kryoglobuliny môže byť detekovaná v rôznych chorôb vnútorných orgánov, vrátane pomerne často v systémových reumatických chorôb.

V závislosti od zloženia kryoglobuliny je rozdelená do troch hlavných typov. Typu I sa skladá z monoklonálnych imunoglobulínov IgA alebo IgM, aspoň - monoklonálne ľahké reťazce (Bence Jones proteín). Typ II (pozorované v tzv zmiešané kryoglobulinemie) zložené z monoklonálneho imunoglobulínu (zvyčajne IgM, zriedka - IgA alebo IgG), ktoré majú aktivitu proti antiglobulínový polyklonálne IgG. Typ III (pozorované v tzv zmiešané kryoglobulinemie) sa skladá z jednej alebo viacerých tried polyklonálnych imunoglobulínov. Najbežnejšia forma kryoglobulinemie u reumatických chorôb je ten typ III sa nachádza v SLE, RA, systémová skleróza, Sjögrenov syndróm.

Cirkulujúcich imunokomplexov (CIC). Zvyšujúca sa koncentrácia odráža CEC zápalovej a imunologickej aktivity patologického procesu v SLE, RA, séronegatívne spondyloartropatie.

VI Mazur

Delež v družabnih omrežjih:

Podobno