Stabilizácia imunoglobulínov haptény. Závislosť konformácie protilátky teploty

Existujú údaje z rôznych metódy, smerujúce k zvýšeniu stability protilátky a ich Fab fragmentov vyplývajúce z zlúčenie s haptény. Napríklad prídavok nich zvyšuje stabilitu haptén molekúl denatiruyuschemu pôsobeniu guanidínu hydrochloridu (Cathy, Werner, 1970) a pre pôsobenie chymotrypsínu (Grossberg napr. A., 1965).

IgM protilátky tiež stabilizovať špecifické haptény s ohľadom na proteolýzou subtilizínu a chymotrypsínu (Ashman, Metzger, 1971). Bolo preukázané, že zníženie citlivosti k útoku proteázami IgM úplne v dôsledku zmeny vlastností Fab fragmentov. Podľa nášho modelu, sa posunie rovnováha haptén komponentov A a B Fab-fragment vľavo.

Preto, aby vysvetlil citovanej stačí, aby tieto výsledky, že voľná energia je kompaktnejšia konformer Spodná voľná energia konformeru B (t. j. A-konformer stabilnejšie než B). Ak áno, potom k zvýšeniu stability proteínov, nezávisí od toho, ako sa zodpovedajúca rovnováha posun spôsobil.

V skutočnosti sa ukázalo, že posun rovnováha doľava spin-značené diméry ľahkých reťazcov, simulujúce štruktúru Fab-podjednotiek pôsobením 1,2 M NaCl a 0,75 M (NH 4) AS04 zvyšuje ich stabilitu v závislosti na teplote. Podobný posun v rovnováhe medzi A a B konformerů spôsobuje ďalšie rušivé štruktúru proteínu a jeho hydratácie shell činidla, ako je dodecylsulfát sodný a teploty.

závislosť konformační stav IgG detekovaná inými metódami teploty. Napríklad, G. Troitskii a spolupracovníci (1971) a J. F. Kiryuhin a spolupracovníci (1972) od optickej rotačnej disperzie pozorovali reverzibilné zmeny konformácie prechodovú teplotu závislých na pH, od 27 ° do 38 °. Následne sa ukázalo, že v neutrálnej oblasti pH prechodovej teploty nezávisí na Izoelektrické bod IgG.

Avšak, keď pH, vzdialený od izoelektrického bodu, keď je molekula IgG stane dostatočne veľký vlastný náboj, teplota konformační prechody sú úplne chýba (Troitsk e. a., 1973). V VP Zavyalova a personál (Zavyalov napr. A., 1975) uskutočnila mnohostranné výskum myelóm konformácie proteínu v závislosti od pH a teploty od optickej rotačnej disperzie, cirkulární dichroismus spektroskopia znepokojujúce, elektrochemické jodácia a diferenčné skenovacie kalorimetria.

Bolo zistené, že keď pH sa zmenilo 6,0-6,5 dostupnosť chromoforní skupiny rozpúšťadiel znižuje. To môže byť v dôsledku zmien počtu nabitých skupín v proteínu a znižuje intermolekulární elektrostatické sily odporu. Podobný jav - tieniaci časť tyrozín a tryptofán zvyšky (pH 7,35- 0,01 M fosfátového pufra) -nablyudali so zvyšujúcou sa teplotou od 25 do 35 ° C. K tomu dochádza po naviazaní na haptén dinitrofenyl homológny králičie protilátky (IgG).

Tieto výsledky možno považovať za údaj o tom, že oteplenie a formovanie špecifických komplexov s haptény zvyšuje kompaktnosť, ktorý je v súlade s celým radom prácou citovaných vyššie.