Imunoglobulín reaktivita. Metóda spin značeného haptény

Hsia a Malý (hsia, Malá, 1973) skúmali interakciu dva spin-značený haptény - DNP hydrazón derivát N-1-oxyl-2,2,5,5-tetrametyl-3-pyrrolidinonu (I) a M-1- (oxyl-2,2,5,5-tetrametyl-3-metylamino) 2 4-dinitrobenzén (II) s dvoma mislomnymi IgA - MOPC 315 a 460 ako metóda EPR, a na zníženie kvantového výťažku fluorescencie proteínu.

Zistené, že viazanie haptény I a II, proteín MOPC 315 N-O-skupina, v oboch prípadoch sú silne imobilizované stav, ale dva typy imobilizované zložky sú pozorované v ESR spektre zlúčeniny všeobecného vzorca II na rozdiel od rozsahu zlúčenín vzorca I. Pri nadviazaní na proteín MOPC 460 voľného otáčania N-O skupina zlúčeniny všeobecného vzorca I tiež značne obmedzené, zatiaľ čo na skupine zlúčeniny rotácie-N-O II viazanie na tento proteín má malý vplyv.

Avšak, súdiac podľa toho, V blízkosti zníženie kvantového výťažku fluorescencie po nadviazaní proteínových haptény a termodynamiky štúdia tohto procesu spin-značený, afinita zlúčenín vzorca I a proteínov MOPC 315 a 460 II mierne líšiť. V dôsledku toho sa stupeň imobilizácie N-O skupina spin-značené haptény nie sú vo všetkých prípadoch charakterizuje pevnosť komplexu.

Podľa autorov, rozdiely v imobilizácia Zlúčeniny všeobecného vzorca I a II môžu byť spôsobené tým, z dvoch dôvodov: 1) ligandy sa viažu k rôznym miest konformační tuhú aktívne miesto, 2) konformácie aktívneho miesta môžu byť stabilizované v rôznej miere v závislosti od rozdielov v štruktúre ligandov.

v iných Skúmali sme príčiny, čo vzhľad dvoch typov imobilizované zložky v ESR spektre proteínu MOPC 315. Komplex II Ukázalo sa, že je v dôsledku dvoch formách enantomernymi spin-značený haptén II. N-O skupina tvorí ligand s príznakom menej hydrofóbna mikroprostredie, a druhý - viac hydrofóbna, čo má za následok odlišné polohy imobilizované priečinku na osi intenzity magnetického poľa. Viazacie oddelené enantomernyh formy (spin-značený amíny - DNP), proteín MOPC 315 (čo vedie k objaveniu sa iba jeden typ súčasti.

Metóda spin značeného haptény

Substitúcia spin značeného haptény v aktívnych miest protilátok homológnej haptén E boli použité Leutom a Členovia (Leute napr. a., 1972) na stanovenie koncentrácie morfínu v testovacom roztoku. Táto metóda používa účinok silný nárast výšky EPR čiar spektra spin-značeného morfínu v jeho prechode od imobilná stavu k voľnému v dôsledku posunutia aktívneho centra. Výška úzke čiary disinhibited EPR charakteristiky spektra v tomto prípade koncentrácie morfínu v testovanom roztoku.

Dolná hranica citlivosti tento spôsob-10 7M morfín (0,03 mg / ml). Ďalej, tento prístup bol vyvinutý (Montgomery napr. A., 1975) a bol použitý pre určenie koncentrácie počtu liekov v sére. Ukázalo sa, že 100 (krát citlivejší než konvenčné chemickou metódou a vlastnil vysokú špecifitu. Pre jeden stanovenie pomerne 50 ul séra.

Hsia a jeho spolupracovníci používajú komplex DNF - metylén (N-1-oxyl-2,2,5,5, tetrametyl-3-metyl-aminopyrrolidin-2,4-dinitrobenzén) s myelomovými IgA (MOPC 315) ako modelový systém pre štúdium skríženú reaktivitu proteínu s ohľadom na DFT a jeho analógy. Na množstvo voľných, aktívnych centier vzdialených od spin-značený haptén posudzovala intenzity EPR zložiek spektra vysokopolyyuy. Kvantitatívne odhady získané touto metódou sú v dobrej zhode s výsledkami rovnovážnej dialýzy. Navrhovaná metóda je veľmi sľubné v imunochemických štúdiách.
tieto závery o štruktúre aktívneho miesta protilátok môže byť vykonané na základe získaných dát.